[发明专利]一种同时测定不同产地穿山龙药材中四种活性成分含量的方法

说明书

本发明公开了一种同时测定不同产地穿山龙药材中四种活性成分含量的方法，包括以下步骤：(1)对照品溶液制备；(2)供试品溶液制备；(3)高效液相色谱分析：色谱柱：XBridge C18(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈为流动相A，水为流动相B进行梯度洗脱，洗脱程序为：0～5min,5％A；5～15min,5％～15％A；15～55min,15％～45％A；55～65min,45％～100％A；65～80min,100％A；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；检测波长：208nm；柱温：30℃；(4)标准曲线制作；(5)样品含量测定。本发明操作简便、分离快速，使用范围广，可对穿山龙药材、制剂及不同薯蓣属中薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷含量同时测定，为穿山龙和其制剂的质量控制提供了重要的参考依据。

技术领域

本发明属于中药材质量检测分析技术领域，涉及一种同时测定不同产地穿山龙药材中四种活性成分含量的方法。

背景技术

穿山龙又名穿龙薯蓣、野山药、地龙骨、鸡骨头、龙萆，为薯蓣科植物穿龙薯蓣(Dioscorea nipoonica Makino)的干燥根茎，具有舒筋活络、祛风止痛风、治疗湿痹病、关节肿胀、疼痛麻木等功效。穿山龙的根茎主要含有甾体皂苷类成分，其地上部分主要含有菲类及黄酮类化合物。现代药理研究表明其具有降血糖、调节免疫力、改善心血管功能、抗肿瘤等功效。甾体皂苷类化合物为穿山龙主要有效成分，其中薯蓣皂苷具有抗肿瘤、抗血栓形成、抗过敏、抗病毒和抗休克作用；原薯蓣皂苷能够抑制癌细胞；伪原薯蓣皂苷具有抗真菌、抗病毒以及预防心血管系统疾病的活性；甲基原薯蓣皂苷能够抑制九大瘤系60种肿瘤细胞的细胞毒性功效等。

中国专利申请CN101791366A公开了一种对不同产地穿龙薯蓣及同属药材进行质量检测的方法，能够分别测定穿龙薯蓣及同属药材中薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷的含量，但是无法同时测定多种有效成分，步骤复杂；中国专利申请CN104502485A公开了一种由穿山龙和刺五加为药材的中药复方制剂中6个化学成分的定量分析方法，能够同时测定由穿山龙和刺五加为药材的中药复方制剂中薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷的含量；《中国实验方剂学杂志》2012年5月第18卷第9期公开了《RP-HPLC同时测定穿山龙药材中原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂和伪原薯蓣皂苷的含量》，能够同时测定穿山龙药材中的三种活性成分。虽然现有技术可以同时测定穿山龙药材中的三种活性成分，但是仍然不能全面反映穿山龙药材的质量。

发明内容

本发明的目的是提供一种同时测定不同产地穿山龙药材中四种活性成分含量的方法，操作简单快速，准确度高，重现性好。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种同时测定不同产地穿山龙药材中四种活性成分含量的方法，包括以下步骤：

(1)对照品溶液制备：分别精密称取薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷的对照品适量，置于同一个量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成每1ml含1mg薯蓣皂苷、1mg伪原薯蓣皂苷、1mg原薯蓣皂苷、1mg甲基原薯蓣皂苷的对照品混合溶液；

(2)供试品溶液制备：精密称取穿山龙药材粉末1g，置于具塞锥形瓶中，精密加入30ml甲醇，浸泡10min，称定重量，超声提取3次，每次30min，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，合并提取液减压浓缩，定容至10ml，用微孔滤膜过滤，制成供试品溶液；

(3)高效液相色谱分析：采用高效液相色谱法进行测定，具体条件如下：色谱柱：XBridge C18，250mm×4.6mm，5μm；以乙腈为流动相A，水为流动相B进行梯度洗脱，洗脱程序为：0～5min,5％A；5～15min,5％～15％A；15～55min,15％～45％A；55～65min,45％～100％A；65～80min,100％A；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；检测波长：208nm；柱温：30℃；