[发明专利]一种培育高结瘤固氮转基因植物的方法

权利要求书

1.一种培育具有高结瘤固氮能力转基因植物的方法，其特征在于：在植物中过表达SEQID NO：1所示的基因，培育出具有高结瘤固氮能力的转基因植物；所述植物为大豆。

2.根据权利要求1所述的培育具有 高结瘤固氮能力 转基因植物的方法，其特征在于：首先构建含有SEQ ID NO：1所示基因的重组过表达载体，然后利用此重组过表达载体构建转化体，再利用此转化体侵染目的植物，筛选得到与正常植物相比具有高结瘤固氮能力的转基因植物。

3.根据权利要求2所述的培育具有 高结瘤固氮能力 转基因植物的方法，其特征在于：所述重组过表达载体的空载体为pTF101质粒。

4.根据权利要求3所述的培育具有 高结瘤固氮能力 转基因植物的方法，其特征在于：利用限制性内切酶Xba I和BamH I将SEQ ID NO：1所示基因连接到空载体上构建重组过表达载体。

5.根据权利要求2所述的培育具有 高结瘤固氮能力 转基因植物的方法，其特征在于：所述转化体为农杆菌。

6.根据权利要求1所述的培育具有 高结瘤固氮能力 转基因植物的方法，其特征在于：该方法包含如下步骤：

A、构建含有SEQ ID NO：1所示基因的重组表达载体：

A-1、首先以大豆叶片DNA为模板，扩增获得SEQ ID NO：1所示多核苷酸序列并连接至T载体上，然后用限制性内切酶Xba I和BamH I酶切所得T载体质粒，回收酶切产物；

A-2、用限制性内切酶Xba I和BamH I酶切空载体pTF101质粒，回收载体骨架；

A-3、用T4连接酶将步骤A-1的酶切产物和步骤A-2的载体骨架连接，连接产物热激转化大肠杆菌感受态DH5α菌株，37℃过夜培养，挑取阳性克隆进行测序验证，得到重组表达载体；

B、采用液氮冻溶法转化农杆菌制备转化体：

B-1、取出冻存的200 μL 感受态农杆菌细胞，融化后加入5-10 μL步骤A所得重组表达载体的质粒DNA，轻弹管壁混匀，冰上静置20-30 min；

B-2、上步所得放入液氮中5 min后取出，转入37℃、5 min 融化后，加入800 μL YEP液体培养基，28℃低速振荡、150 rpm，4-5 h；

B-3、离心操作，10000 rpm，30 sec，去上清，加100 μL YEP 液体培养基，悬浮菌体后涂板；

B-4、上步所得置于28℃培养至白色转化子长出，挑取阳性单克隆摇菌，得到用于大豆子叶节转化的转化体。