[发明专利]一种流感病毒基因片段SERS检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种流感病毒基因片段SERS检测试剂盒，其特征在于，所述SERS检测试剂盒包括固相SERS基片、第一试剂和第四试剂，所述固相SERS基片是表面沉积有银纳米棒阵列的玻璃片，所述第一试剂包含能与流感病毒基因片段碱基序列完全互补的Replace链，以及能与Replace链部分碱基互补的Capture链，所述Replace链与Capture链的部分核苷酸序列互补杂交形成Replace-Capture双链；所述第四试剂为修饰有染料分子的能与Capture链互补杂交的Probe链。

2.根据权利要求1所述的流感病毒基因片段SERS检测试剂盒，其特征在于，所述SERS检测试剂盒还包括第二试剂核酸外切酶Ⅲ和第三试剂巯基己醇。

3.根据权利要求1所述的流感病毒基因片段SERS检测试剂盒，其特征在于，所述流感病毒基因片段为H7病毒基因片段；和/或N9病毒基因片段。

4.根据权利要求1所述的流感病毒基因片段SERS检测试剂盒，其特征在于，所述流感病毒基因片段为H7病毒基因片段时，所述Replace链碱基序列如SEQ ID NO：1所示，所述Capture链碱基序列如SEQ ID NO：2所示；和/或所述流感病毒基因片段为N9病毒基因片段时，所述Replace链的碱基序列如SEQ ID NO：3所示，所述Capture链碱基序列如SEQ ID NO：4所示。

5.根据权利要求1或4所述的流感病毒基因片段SERS检测试剂盒，其特征在于，所述流感病毒基因片段为H7病毒基因片段时，所述Probe链的碱基序列如SEQ ID NO：5 所示；和/或所述流感病毒基因片段为N9病毒基因片段时，所述Probe链的碱基序列如SEQ ID NO：6所示。

6.权利要求1~5任一项所述的流感病毒基因片段SERS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）固相SERS基片的制备；

2）第一试剂的获得：根据所述流感病毒基因片段设计对应的Replace链，再根据Replace链设计Capture链；

3）第四试剂的获得：根据Capture链设计修饰有染料分子的Probe链。

7.根据权利要求6所述的流感病毒基因片段SERS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述Capture链和Replace链浓度相同，浓度范围均为1-10 µM。

8.根据权利要求6所述的流感病毒基因片段SERS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述Probe链的浓度范围为1-10 µM。

9.权利要求1~5任一项所述的流感病毒基因片段SERS检测试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）用纯水多次清洗试剂盒中的固相SERS基片；

2）向试剂盒的第一试剂中加入检测样品共培养；

3）向步骤2）中加入第二试剂；

4）将步骤1）得到的固相SERS基片与步骤3）溶液共培育；

5）缓冲液冲洗步骤4）得到的基片后，用第三试剂封闭基片表面；

6）缓冲液冲洗步骤5）得到的基片后，将第四试剂滴加到SERS基片表面共培育；

7）纯水冲洗步骤6）得到的基片后，进行SERS检测。

10.根据权利要求9所述的流感病毒基因片段SERS检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述步骤2）中的共培养条件为20-30℃，培养1-1.5 h，所述步骤3）中加入第二试剂后培养条件为35-40℃，30-40 min；所述步骤4）的培育条件为20-30℃，培养3-4 h；所述步骤5）的培养条件为20-30℃，静置培养10-20 min；所述步骤6）的培养条件为25-30℃，静置培养1-1.5 h。