[发明专利]治疗乙型肝炎病毒（HBV）感染的方法

说明书

在本发明中，人类肝细胞核中HBc相互作用因子的蛋白质组学鉴定揭示了大部分RNA结合蛋白(RBPs)参与mRNA代谢，并且特别是发现了富含丝氨酸/精氨酸的剪接因子10(SRSF10)在HBc复合物中富集了近3000倍。发明人证明，用小分子1C8(4‑吡啶酮苯并噻唑咪唑甲酰胺)抑制SRSF10磷酸化，可在持续感染的肝细胞中强烈抑制HBV复制(基因型C和D)，以及在新生感染中强烈抑制HBV cccDNA的建立。因此，本发明涉及一种用于治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染的SRSF10活性抑制剂，所述抑制剂将SRSF10保持在去磷酸化状态，并防止或降低SRSF10的剪接活性。

发明领域

本发明涉及使用SRSF10(富含丝氨酸/精氨酸的剪接因子10)的生物活性抑制剂治疗乙型肝炎病毒感染的方法和药物组合物，特别是所述抑制剂使SRSF10保持在去磷酸化状态，并阻止或降低SRSF10的剪接活性。

发明背景

尽管存在预防性疫苗，但慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染在世界范围内仍然是主要健康问题，因为它们涉及2.5亿人口，并且表现为原发性肝癌(肝细胞癌，HCC)的首要诱因(Petruzziello，2018)。目前临床上公认的针对HBV慢性感染的抗病毒治疗包括直接靶向由病毒DNA转录并间接增强宿主免疫反应的聚乙二醇化干扰素-α(IFN-α和/或特异性抑制HBV逆转录的核苷类似物(NUC)。这些治疗通常会导致患者血液中的病毒血症短暂降低(针对IFN)或持久降低(针对NUC)(Zoulim和Durantel，2015)。然而，很少取得肝脏病毒的清除，因此必须使用NUC进行终身治疗。因此，迫切需要开发能够直接或间接抑制HBV复制的新型抗病毒分子，这些抗病毒分子可用于组合疗法。

在高度复制HBV的细胞中，HBV核心蛋白(HBc)积聚在细胞核中，这意味着，除了众所周知的其在pgRNA的衣壳化和随后的逆转录产生病毒粒子基因组中的作用外，HBc可能还具有其他调控功能。早期研究表明，HBc与HBV cccDNA以及细胞DNA结合(Zlotnick等，2015)。这些发现表明，该病毒蛋白可通过招募表观遗传调控因子和/或阻止接近沉默因子来调节病毒微型染色体(cccDNA)的表达。然而，最近的研究表明，新合成的HBc并非HBV转录本身所需。因此，HBc的细胞核功能仍然不明确(Seeger等，2015)。

为了破译HBc的细胞核功能，发明人鉴定了其在人类分化的肝细胞中的细胞核伙伴。对人类肝细胞核中的HBc相互作用因子的蛋白质组学鉴定揭示了大多数RNA结合蛋白(RBPs)参与mRNA的代谢。特别地，发现了富含丝氨酸/精氨酸的剪接因子10(SRSF10)在HBc复合物中富集了近3000倍，因此突出了HBc与该核RNA结合因子的强且优先的相互作用。

为了进一步研究SRSF10在HBV复制过程中的作用，发明人使用了化合物1C8(4-吡啶酮苯并异噻唑甲酰胺(4-pyridinonebenzisothiazole carboxamide))，该化合物最近被确定为HIV-1复制的强抑制剂(Shkreta等，2017)。1C8最初被鉴定为IDC16的结构模拟物，IDC16是一种抑制主要SR因子SRSF1剪接功能的药物(Cheung等，2016)。分子分析表明，1C8并不抑制SRSF1，而是阻止SRSF10的磷酸化，从而调节其剪接活性(Shkreta等，2017)。特别地，1C8被揭示可抑制SRSF10在丝氨酸133的磷酸化。此残基的磷酸化以及丝氨酸131发生的磷酸化先前被发现会改变与其他剪接因子的相互作用(Shkreta等，2017)。体外研究表明，1C8强烈抑制HIV复制，而对细胞基因和细胞活力的影响很小。

HIV复制的抑制与剪接的病毒mRNA合成的改变有关并且与SRSF10和HIV mRNAs的结合减少有关(Shkreta等，2017)。专利申请WO2015/164956公开了苯并异噻唑衍生物化合物(属于1C8)及其在治疗HIV感染中的用途。

发明内容