[发明专利]使马尿酸类与苦杏仁酸分离的分离管柱与液相色谱仪、以及马尿酸类与苦杏仁酸的分析方法

说明书

本发明涉及一种使马尿酸类与苦杏仁酸分离的分离管柱与液相色谱仪、以及马尿酸类与苦杏仁酸的分析方法，马尿酸类分析用的分离管柱(12)是填充有填充剂的分离管柱，所述填充剂中123μmol/g以上的β‑环糊精化学键结于二氧化硅基材。通过使用使123μmol/g以上的β‑环糊精化学键结于二氧化硅基材的物质作为分离管柱(12)的填充剂，即使不使用含有环糊精的流动相，也能够实现马尿酸、邻甲基马尿酸、间甲基马尿酸、对甲基马尿酸、苦杏仁酸的分离。

技术领域

本发明涉及一种使马尿酸类与苦杏仁酸分离的分离管柱、使马尿酸类与苦杏仁酸分离的液相色谱仪、以及马尿酸类与苦杏仁酸的分析方法。

背景技术

甲苯及二甲苯作为涂料或接着剂的溶剂被大量使用，报告有因作业引起的中毒例或因青少年的稀释剂玩耍引起的中毒例。日本国内，根据劳动卫生基准法，规定必须对从事有机溶剂业务的作业人员进行特殊健康诊断，即，测定作为有机溶剂的暴露指标的尿中代谢物(甲苯为马尿酸，二甲苯为甲基马尿酸)，这些尿中代谢物测定在临床检查公司中通过高效液相色谱紫外线(high performance liquid chromatography-ultraviolet，HPLC-UV)法进行检查。

根据富士经济股份有限公司的报告，世界的临床检查市场在2020年达到704亿美元(USD)(7兆2000亿日元)，并且，自2015年起的年平均增长率以2.4％推移。日美欧三极市场中装置的更新需要差不多，但新兴国家(东欧、俄罗斯、中国、南美、非洲)的检查环境还在整备中，因此加速了包括装置的新颖引进在内的检查体制的强化，预计今后也会带动临床检查市场。

日本国内有大型临床检查公司(SRL、BML、LSI美迪恩斯(Medience)、法尔科生物系统(FALCO biosystems)、江东微生物研究所、保健科学研究所)等承担尿中代谢物分析。这些临床检查公司以分析业务的效率化及生产性提高为目的，盛行超高速液相色谱(LC)系统的导入、新颖分析法的采用等。这些尿中代谢物测定在临床检查公司中通过HPLC-UV法进行检查。

发明内容

[发明所要解决的问题]

在利用HPLC-UV法的检查中，使用C18管柱作为分离管柱，实施了以包含磷酸缓冲液及乙腈的液体为流动相的反相分析。但是，在这样的反相分析中，无法将马尿酸、邻甲基马尿酸、间甲基马尿酸、对甲基马尿酸、苦杏仁酸等分析对象成分全部分离。

因此，还实施了使用含有环糊精(cyclodextrin)的液体作为流动相的分析。但是，环糊精及缓冲液容易以盐的形式析出，因而存在会成为分离管柱及装置的故障的原因，此外，无法进行使用质谱仪的分析的问题。

本发明是鉴于所述问题而完成，其目的在于，不使用含有环糊精的流动相便能够进行马尿酸类的分离、分析。

[解决问题的技术手段]

本发明的马尿酸类分析用的分离管柱是填充有填充剂的分离管柱，所述填充剂是123μmol/g以上的β-环糊精化学键结于二氧化硅基材而成。本发明人等确认到，通过使用使123μmol/g以上的β-环糊精化学键结于二氧化硅基材的物质作为分离管柱的填充剂，即使不使用含有环糊精的流动相，也能够进行马尿酸、邻甲基马尿酸、间甲基马尿酸、对甲基马尿酸、苦杏仁酸的分离。因此，若使用本发明的分离管柱，则不使用含有环糊精的流动相便能够进行马尿酸类的分离、分析。

另外，在本发明人等实施的实验中确认到，β-环糊精对二氧化硅基材的化学键结量越多，马尿酸类的分离越提高。另一方面，在所述实验中还确认到，β-环糊精对二氧化硅基材的化学键结量越多，各成分自分离管柱的析出时间越长。为了效率良好地进行多个检体的检查，需要缩短一个检体的分析所需要的时间，一个检体的分析所需要的时间理想为5分钟以内，更优选为4分钟以内。