[发明专利]用于基因编辑的Cpf1-相关方法和组合物

权利要求书

1.一种分离的细胞，所述分离的细胞包含由RNP复合物的递送产生的在HBG基因序列或BCL11a基因序列中的修饰，所述RNP复合物包含来自普雷沃菌属(Prevotella)和弗朗西斯菌属(Franciscella)1(Cpf1)RNA指导的核酸酶的CRISPR和靶向所述HBG基因序列或所述BCL11a基因序列的gRNA分子。

2.一种CD34+细胞群或造血干细胞(HSC)细胞群，其中一个或多个细胞包含所述HBG基因的顺式调控区中的破坏，其中所述破坏是使用RNP复合物产生的，所述RNP复合物包含CRISPR/Cpf1 RNA指导的核酸酶和靶向所述HBG基因的所述顺式调控区的gRNA。

3.根据权利要求2所述的细胞群，其中所述顺式调控区包括HBG基因启动子的CAAT盒。

4.一种治疗或减轻有需要的受试者中的血红蛋白病症状的方法，所述方法向所述受试者施用根据权利要求2或3所述的细胞群。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述细胞群具有与未经修饰的细胞群相比表达增加的胎儿血红蛋白表达，或在施用之后导致胎儿血红蛋白表达增加，其中，胎儿血红蛋白表达的增加的量适于部分或完全减轻血红蛋白病的症状。

6.一种分离的T细胞，所述分离的T细胞包含由复合物的递送产生的在核酸序列中的修饰，所述复合物包含来自普雷沃菌属和弗朗西斯菌属1(Cpf1)RNA指导的核酸酶的CRISPR和靶向所述核酸序列的gRNA分子，其中所述核酸序列选自由以下组成的组：FAS基因序列的一部分、BID基因序列的一部分、CTLA4基因序列的一部分、PDCD1基因序列的一部分、CBLB基因序列的一部分、PTPN6基因序列的一部分、B2M基因序列的一部分、TRAC基因序列的一部分、CIITA基因序列的一部分、TRBC基因序列的一部分及其组合。

7.一种T细胞群，所述T细胞群包含选自由TRAC、TRBC、B2M和CIITA组成的组中的一个或多个基因的破坏，其中所述破坏是使用一种或多种RNP复合物产生的，所述RNP复合物包含CRISPR/CPf1 RNA指导的核酸酶和靶向选自由TRAC、TRBC、CIITA和B2M组成的组中的基因的gRNA，其中，所述T细胞群中至少60％的T细胞不包含所述T细胞表面上可检测水平的MHC II受体、TCR或B2M。

8.根据权利要求7所述的T细胞群，所述T细胞群进一步包含嵌合抗原受体(CAR)或插入破坏的TRAC基因座的工程化的T细胞受体(eTCR)。

9.根据权利要求6、7或8所述的分离的T细胞或T细胞群，其中所述T细胞是CD8⁺T细胞、CD8⁺天然T细胞、CD4⁺中枢记忆T细胞、CD8⁺中枢记忆T细胞、CD4⁺效应记忆T细胞、CD4⁺效应记忆T细胞、CD4⁺T细胞、CD4⁺干细胞记忆T细胞、CD8⁺干细胞记忆T细胞、CD4⁺辅助T细胞、调节性T细胞、细胞毒性T细胞、自然杀伤T细胞、CD4+天然T细胞、TH17 CD4⁺T细胞、TH1 CD4⁺T细胞、TH2 CD4⁺T细胞、TH9 CD4⁺T细胞、CD4⁺Foxp3⁺T细胞、CD4⁺CD25⁺CD127^-T细胞或CD4⁺CD25⁺CD127^-Foxp3⁺T细胞。