[发明专利]用于活化、修饰和扩增γδT细胞治疗癌症和相关恶性肿瘤的方法

说明书

本公开内容涉及T细胞的扩增和活化。一方面，本公开内容涉及可用于转基因表达的γδT细胞的扩增和活化。另一方面，本公开内容涉及γδT细胞的扩增和活化，同时消耗α‑和/或β‑TCR阳性细胞。本公开内容还提供了包含扩增的γδT细胞和消耗或减少的α‑和/或β‑TCR阳性细胞的T细胞群。本公开还提供了使用所公开T细胞群的方法。

相关申请的交叉引用

本文为专利合作条约下的国际申请，要求11月27日提交的美国临时申请序列号62/591,041的权益，2017年11月27日提交的德国申请102017127984.9，其内容通过引用整体并入本文。

背景

1.技术领域

本公开内容涉及T细胞的扩增和活化。一方面，本公开内容涉及可用于转基因表达的γδT细胞的扩增和活化。另一方面，本公开内容涉及γδT细胞的扩增和活化，同时消耗α-和/或β-TCR阳性细胞。本公开内容还提供了包含扩增的γδT细胞和消耗或减少的α-和/或β-TCR阳性细胞的T细胞群。本公开还提供了使用所公开T细胞群的方法

2.技术背景

γδT细胞代表表达γδTCR而非αβTCR的T细胞子集。γδT细胞可分为两个主要子集：与组织结合的Vδ2阴性细胞和外周循环中的Vδ2阳性细胞，更具体地说是Vγ9δ2。两个子集已被证明都具有抗病毒和抗肿瘤活性。与常规表达αβTCR的细胞不同，表达γδTCR的细胞识别其靶标而不依赖于经典的MHC I和II。与自然杀伤(NK)T细胞相似，γδT细胞表达NKG2D，其结合于非经典MHC分子，即，存在于受应激细胞和/或肿瘤细胞上的MHC I类多肽相关序列A(MICA)和MHC I类多肽相关序列B(MICB)。γδTCR识别多种配体，例如，应激和/或肿瘤相关的磷酸抗原。γδT细胞透过多种机制(即TRAIL，FasL，穿孔素和颗粒酶分泌)介导其靶标的直接细胞溶解。此外，表达CD16的γδT细胞增强抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。

γδT细胞(外周血中可能通常仅存在1％至5％的量)的一个问题是不能确保有足量用于医学治疗的γδT细胞的纯度和数量，尤其是因为只收集了少量血液，然后活化和/或增殖其中的细胞。增加患者采集血液量以确保足以用于医学治疗的γδT细胞的纯度和数量也带来了一个问题，即它给患者带来了很大的负担。

迄今为止，使用自体Vγ9δ2 T细胞的临床试验可能使用Vγ9δ2 T细胞扩增方案，该方案是用双膦酸盐(即唑来膦酸盐和帕米膦酸盐)和100U/ml IL-2处理PBMC 14天。该过程最多在14天内可使总Vγ9δ2 T细胞增加100倍；此后，扩增率降低，这与细胞死亡的增加相一致。因此，传统Vγ9δ2扩增方案可能无法产生足够数量的细胞以符合商业上可行的同种异体产品。

美国专利7,749,760描述了含有双膦酸盐，白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素18(IL-18)的Vγ9Vδ2 T细胞增殖剂。

美国专利8,962,313描述了通过向分离的外周血液中添加疾病抗原并在含有白细胞介素的培养基中培养所得的组合来同时增殖疾病抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和γδT细胞的方法。

WO2014/072446描述了使用γδT细胞活化剂和IL-33的组合诱导γδT细胞的无IL-2增殖的方法，其用于的治疗感染、癌症、自身免疫性以及其他疾病。

WO2016/166544描述了γδT细胞可在磷酸抗原异戊烯焦磷酸(IPP)的存在下扩增，并可在培养步骤中提供细胞因子以促进γδT细胞的增殖并维持外周血单核细胞的细胞表型。

美国专利2011/0158954描述了一种制备γδT细胞群的方法，其中该方法包括在(a)纤连蛋白，纤连蛋白片段或其混合物和(b)中γδT细胞活化因子存在下培养含有γδT细胞的细胞群的步骤。