[发明专利]细胞因子诱导型含SH2蛋白（CISH）基因的遗传修饰

权利要求书

1.一种遗传修饰的细胞，其包含内源性CISH基因外显子2或外显子3内的基因组修饰。

2.如权利要求1所述的遗传修饰的细胞，其中，所述基因组修饰选自插入和/或缺失。

3.如权利要求1或2所述的遗传修饰的细胞，其中，一种或多种转基因被整合进入所述CISH基因中。

4.如权利要求3所述的遗传修饰的细胞，其中，所述转基因编码嵌合抗原受体(CAR)，免疫调节因子，工程改造或外源性T细胞受体(TCR)。

5.如权利要求4所述的遗传修饰的细胞，其中，所述工程改造的TCR是抗体偶联的T细胞受体(ACTR)。

6.如权利要求1-5中任一项所述的遗传修饰的细胞，其中，CISH基因在通过核酸酶切割后被修饰。

7.如权利要求6所述的遗传修饰的细胞，其中，所述核酸酶选自下组：锌指核酸酶、TALEN和/或CRISPR/Cas核酸酶系统。

8.如权利要求6或7所述的遗传修饰的细胞，其中，所述核酸酶包含DNA结合结构域，所述DNA结合结构域结合表2中所示的靶位点。

9.如权利要求7或8所述的遗传修饰的细胞，其中，所述锌指核酸酶包含锌指蛋白，所述锌指蛋白包含4、5或6个锌指结构域，所述锌指结构域包含识别螺旋，并且其中所述锌指蛋白包含名为SBS#59488、SBS#59489、SBS#59440、SBS#59441、SBS#59558、SBS#59557、SBS#59581或SBS#59580的蛋白质的识别螺旋区。

10.如权利要求1-9中任一项所述的遗传修饰的细胞或由其衍生的细胞，其中，所述细胞选自下组：造血干细胞、T效应细胞和T调节细胞。

11.一种锌指蛋白，其包含6个锌指结构域，其各自包含识别螺旋区，其中所述锌指蛋白包含名为SBS#59488、SBS#59489、SBS#59440、SBS#59441、SBS#59558、SBS#59557、SBS#59581或SBS#59580的蛋白质的识别螺旋区。

12.一种融合蛋白，其包含权利要求11所述锌指蛋白和野生型或工程改造的切割结构域或野生型或工程改造的切割半结构域。

13.一种多核苷酸，其编码一种或多种权利要求11或12所述的蛋白质。

14.一种分离的细胞，其包含一种或多种权利要求11或12所述的蛋白质和/或一种或多种权利要求13所述的多核苷酸。

15.如权利要求14所述的分离的细胞或由其衍生的细胞，其中，所述细胞选自下组：T效应细胞、T调节细胞和造血干细胞。

16.一种试剂盒，其包含一种或多种权利要求11或12所述的蛋白质，一种或多种权利要求13所述的多核苷酸和/或一种或多种权利要求14或15所述的分离的细胞。

17.一种生成根据权利要求1-15中任一项所述的遗传修饰的细胞的方法，所述方法包括向所述细胞导入编码一种或多种核酸酶的一种或多种多核苷酸，所述一种或多种核酸酶包含结合CISH基因外显子2或外显子3中靶位点的DNA结合结构域，其中所述核酸酶结合并切割所述CISH基因，从而遗传修饰所述细胞。

18.如权利要求17所述的方法，其中，所述遗传修饰的细胞包含转基因，所述转基因被整合进入CISH基因并在所述细胞中表达。

19.一种向有此需要的对象提供蛋白质的方法，所述方法包括给予根据权利要求3-15中任一项所述的遗传修饰的细胞，其中所述细胞在所述对象中表达转基因。