[发明专利]泊洛沙姆组合物及其制造和使用方法

说明书

本文中描述了在细胞培养中用作剪切保护剂的泊洛沙姆组合物以及制备和使用此类组合物的方法。

相关申请的交叉参考

本申请要求2017年12月21日提交的美国临时申请号62/608,826的优先权权益，其全部内容通过引用并入本文。

公开领域

本公开大体上涉及在细胞培养中用作剪切保护剂的泊洛沙姆组合物以及制备和使用此类组合物的方法。

公开背景

泊洛沙姆，尤其是泊洛沙姆188，用在许多工业应用、化妆品和药物中。它们还用在细胞培养基过程中。向细胞培养基中添加泊洛沙姆，尤其是泊洛沙姆188，显著改善细胞活力。高细胞活力对优化的蛋白质生产至关重要。泊洛沙姆为何改善细胞活力尚未被完全了解。据信，泊洛沙姆降低了剪切应力，并以这种方式保护细胞免受损伤。泊洛沙姆作为一种非离子型表面活性剂，可能集中在气泡/培养基界面处，并可以防止细胞附着到气泡上，并以这种方式在气泡破裂时防止细胞受损伤。其还可以在气泡破裂时降低震扰。一些出版物声称，泊洛沙姆改善了由气相进入液相的氧转移速率，但是其它出版物反驳了这些发现。也有迹象表明泊洛沙姆可以“修复”细胞膜中的小缺陷。

通常，泊洛沙姆是聚乙二醇(PEG)/聚丙二醇(PPG)三嵌段共聚物，CAS号9003-11-6，具有通式I：

其中x和z优选独立地为5至150，且y优选为15至67。

称为泊洛沙姆188的常规使用的产品具有介于7680 g/mol和9510 g/mol之间的平均分子量(根据药典定义和测定)。在式I中，对于泊洛沙姆188，x和z各自为约80，且y为约27。该化合物作为泊洛沙姆188、Pluronic® F 68、Kolliphor® P 188、Lutrol® F 68、SYNPERONIC^TM PE/F 68或PLONON #188P市售可得。它们以多种物理形式市售可得(Pluronics®或Lutrole®，例如Pluronic®溶液、凝胶或固体，例如Pluronic® F-68)。或者，泊洛沙姆可以根据本领域中已知的方法由原材料制得(参见例如美国专利号3,579,465和3,740,421)。关于泊洛沙姆的进一步信息可以在Hagers Handbuch derPharmazeutischen Praxis, 第9卷“Stoffe P-Z”，1994，第282至284页中找到。

当用在细胞培养基中时，在市售可得的泊洛沙姆如泊洛沙姆188批次中观察到显著的批次间差异。由于一些批次不会充分保护细胞免于损伤/死亡，结果，它们不适用于细胞培养。其原因仍未完全了解。结果，当使用这些“坏”批次时，细胞活力明显较低。

公开概述

在本公开的各种方面中，提供了与泊洛沙姆188相比具有更低的平均分子量的泊洛沙姆组合物。还提供了制造该泊洛沙姆组合物的方法及其用途。

因此，简而言之，本公开涉及具有式I的泊洛沙姆组合物：

其中y为约15至约26；x和z之和为约81至约100；并且该组合物具有约6,000 g/mol至约8,000 g/mol范围内的平均分子量。

本公开的另一方面涉及制造基本如本文中和附图中所公开的泊洛沙姆组合物的方法。本公开的再一方面涉及基本如本文中和附图中所公开的泊洛沙姆组合物的用途。本公开的其它方面涉及基本如本文中和附图中所公开的方法、组合物、用途和发明。

其它目的和特征将在下文中部分显然易见和部分指出。

附图简述