[发明专利]用于改善抗VEGF抗体的VEGF受体阻断选择性的方法

说明书

本发明涉及用于改善抗VEGF抗体以提供或改善优先抑制VEGF与VEGF‑R2结合而不是VEGF与VEGF‑R1结合的抗体的方法，以及通过所述方法提供的抗体。

发明领域

本发明涉及用于改善抗VEGF抗体以提供或改善优先抑制VEGF与VEGF-R2结合而不是VEGF与VEGF-R1结合的抗体的方法，以及通过所述方法提供的抗体。

背景技术

被批准用于临床应用的抗VEGF抗体，例如和抑制VEGF结合两种受体，VEGF-R1(FLT-1，fms样酪氨酸激酶)和VEGF-R2(KDR/FLK-1，胎肝激酶)。VEGF-R1和VEGF-R2是密切相关的受体酪氨酸激酶(RTK)。尽管假设VEGF-R2主要负责VEGF介导的血管发生(Holash，J.等人，Proc Natl Acad Sci U S A.2002Aug 20；99(17)：11393-8)，已知VEGF-R1具有与血管发生无关的其它重要的生物学作用，例如在破骨细胞分化中(Aldridge，S.E.等人，Biochem Biophys Res Commun.2005Sep30；335(3)：793-8)。

已经报道了一些抗VEGF抗体，其优先抑制VEGF与VEGF-R2的结合，但不显著抑制VEGF与VEGF-R1的结合，但在临床上尚未成功(WO200064946描述了称为“2C3”的抗体，WO2009060198描述了称为“r84”的抗体，和WO2012089176描述了称为“L3H6”的抗体，EP3006465描述了称为“HF2-1”、“HF2-5”、“HF2-9”和“HF2-11”的抗体)。通过阻断VEGF与VEGF-R2的结合，而不是与VEGF-R1的结合，描述了所述抗体具有改善的安全性特征，并且不显示与抗VEGF治疗相关的常见毒性相关副作用(Brekken，R.A.等人，Cancer Res.2000年9月15日；60(18)：5117-24；Sullivan，L.A.等人，PLoS One，2010年8月6日；5(8)：e12031)。

需要用于改善抗VEGF抗体，尤其是VEGFR阻断选择性的方法，以提供有希望的临床抗体候选物。

发明概述

本发明涉及改善结合VEGF的抗体的VEGFR阻断选择性的方法，所述抗体包含由VH和VL结构域的同源对形成的抗原结合位点，其中所述抗体结合VEGF的表位，所述表位与VEGF分子中的VEGF-R1结合区和VEGF-R2结合区重叠。本发明的方法包括(a)提供对由所述结合VEGF的抗体的第一和第二抗原结合位点结合的VEGF二聚体的复合物(VEG-二聚体-抗体复合物)的三级结构的分析，(b)鉴定位于所述抗体的VH结构域或VL结构域中的至少一个氨基酸残基，其中所述第一抗原结合位点内的所述氨基酸残基和所述第二抗原结合位点内的所述氨基酸残基在VEGF二聚体-抗原复合物中以紧密接近的空间排列；和(c)用具有更大侧链体积的氨基酸置换步骤b)中鉴定的所述至少一个氨基酸残基。

使用本发明的方法，某些抗VEGF抗体的VEGFR阻断选择性可以通过在它们的氨基酸序列中，特别是在不涉及抗原结合的区域中，的一些修饰而改善。这样的抗体可表现出改善的安全性特征，例如通过避免或减少由通过VEGF-R1阻断VEGF-信号传导引起的副作用。

在一个实施方案中，抗体结合VEGF-A121二聚体上的构象表位，其中VEGF-A121包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列，其中所述表位在VEGF二聚体内的单独VEGF-A121分子之一中包含氨基酸F17、M18、D19、Y21、Q22、R23、Y25、H27、P28、I29、E30、M55、N62、L66、N100、K101、C102、E103、C104、R105和P106；和在VEGF二聚体内的另一个单独VEGF-A121分子中包含氨基酸E30、K48、M81和Q87。在一个实施方案中，表位是通过X射线晶体学测量的。

在一个实施方案中，具有更大侧链体积的氨基酸是芳香族氨基酸。