[发明专利]重组腺病毒及包含此病毒的干细胞

说明书

本发明为载入干细胞能力优秀，在低浓度下也可很好的载入干细胞的重组腺病毒及包含病毒的干细胞，并且基因传递的组成成分。另外，本发明涉及药剂学组合物，其载入干细胞的腺病毒具有体内生存能力及对肿瘤的治疗效果优秀。作为抗癌药已引入本发明的腺病毒的干细胞在体内具有优异的弹性并对肿瘤细胞具有治疗作用，并且当用作抗癌剂时不会引起干细胞内残留或肝毒性，所以可全身注射，即使在低剂量下也具有出色的抗癌作用，可作为腺病毒抗癌剂广泛利用。

技术领域

本发明涉及癌特异性基因表达调节能力及对干细胞转染能力优秀的重组腺病毒及上述重组腺病毒转染干细胞，以及利用该方法传递基因及癌特异性治疗剂。

背景技术

随着基因传递载体的腺病毒的各种有点被发掘，在癌症基因治疗中其使用频率呈持续增加趋势。如使用基因疗法治疗癌症时，无需长期并持续表达治疗基因的优点。另外，由于被用于载体的病毒而诱导的宿主免疫反应不会有太大的问题，或者反而会成为有点。因此，腺病毒作为癌症治疗用的遗传基因传达体备受瞩目。特别是，只在癌细胞(肿瘤)内繁殖的选择性杀伤癌细胞腺病毒对正常细胞没有影响，只会选择性并消灭癌细胞，因此被视为新一代未来治疗剂。

但是，作为基因治疗剂，全身注射腺病毒会蓄积在肝组织而诱发毒性或因血液中生成中和抗体，在体内维持时间短，并腺病毒达到肿瘤部位的传递效率低的缺点。因此，在遗传因子治疗中，迫切的需求开发即能维持着腺病毒的优势，并肿瘤部位的特异性及传递效率高的基因治疗剂。

基因治疗剂之一的间充质干细胞(Mesenchymal stem cell，MSC)，在骨髓等多种组织中容易分离，并易于体外培养和增值。另外，体内注射细胞时，可移动到损伤部位，代替损伤细胞，分泌多种生长因子及细胞因子，有抑制疾病及促进损伤部位再生效果。另外，MSC具有移动到肿瘤的肿瘤指向性(tumor tropism)特征，并且不表达共刺激分子(co-stimulatory mole cule)。所以免疫反应低或不产生免疫反应，可进行全身性注射，自我治疗甚至可以进行异体治疗的优点。

因此，利用没有免疫源性，并具有肿瘤靶点性的MSC，试着努力开发出干细胞治疗剂。利用间充质干细胞和腺病毒基因的治疗试着被开发为治疗剂，但没有特定受体的间充质干细胞很难被腺病毒感染。所以到目前为止，间充质干细胞很难作为腺病毒的载体。

甚至，为了基因治疗剂产业发展，一直需要不是自体来源，而是品质不变和能减少单价的异体来源细胞治疗剂的开发。

发明内容

技术问题

本发明的发明人们改善了全身注射和干细胞转染率低的腺病毒，并持续研究注射后高效率传递腺病毒的方法。即使在浓度低的情况下，有优秀的干细胞的转染能力和癌特异性基因表达调节能力的腺病毒、上述腺病毒转染干细胞的开发、利用上述干细胞可以全身给药、对癌的靶向能力优秀及不引起肝毒性等问题。

技术方案

为了实现上述目的，本发明提供包含血清型35的纤维蛋白突触(fiber knob)，并改善转染能力的重组腺病毒。

上述血清型35的纤维蛋白突触(fiber knob)序列编号1的序列组成。

上述重组腺病毒可进一步包括基因表达控制序列和调节靶基因表达的靶基因。

具体地，上述重组腺病毒是5'至3'方向(a)拷贝(copy)6个HRE(缺氧反应元件)的结构域序列；(b)拷贝2个AFP(α-Feto蛋白)增强子A序列，(c)拷贝1个AFP启动子的增强子B序列，和(d)包括AFP启动子序列的基因表达控制序列；上述基因表达控制序列有效连接(operativel y linked)的靶基因；和血清型35纤维蛋白突触(fiber knob)序列。

另外，本发明提供了上述含有重组腺病毒的间充质干细胞(Mesenchymal StemCell,MS C)。