[发明专利]能够复制的腺病毒载体

说明书

提供了用于递送外源免疫原的能够复制的猿猴腺病毒载体。本发明的载体展示外源免疫原的优异复制和表达。它们可用作预防性和治疗性疫苗以及可用于基因疗法中。

序列表

本申请含有已经以ASCII形式电子提交且在此以其整体通过引用并入的序列表。所述ASCII拷贝，在2018年9月28日创建，命名为VU66430_WO_SL.txt，且大小为100,598字节。

发明领域

本发明处于重组腺病毒的领域中。其提供了分离的能够复制的腺病毒载体、重组多核苷酸、多肽、载体和包含多核苷酸和多肽序列的组合物。

发明背景

由于它们的大转基因能力和在各种靶标组织中实现高度有效基因转移的能力，人腺病毒已被广泛用于基因转移应用。重组腺病毒可用于基因疗法中和可用作疫苗。基于猿猴腺病毒的病毒载体可以提供人来源的腺病毒载体用于开发基于核酸的疫苗的用途的替代方案。

大多数人暴露于人腺病毒并发展对人腺病毒的免疫力。需要有效地将分子递送至靶标并使预先存在的对人腺病毒血清型的免疫力的影响最小化的载体。猿猴腺病毒在这方面是有效的；它们与人病毒足够密切相关，以有效地诱导对递送的外源性抗原的免疫力，人对所述递送的外源性抗原几乎没有预先存在的免疫力或没有预先存在的免疫力。

复制缺陷的腺病毒将其基因组递送至细胞的内部，并且因为它们不复制，所以不扩增转基因有效载荷。通常，E1基因被包含选择的启动子和对应于一个或多个目标基因的核酸序列的转基因盒替换，产生复制缺陷的重组病毒。

与复制缺陷的腺病毒不同，能够复制的腺病毒复制其DNA和其转基因，因此在大得多的程度上扩增其转基因表达。能够复制的腺病毒具有更大功效的潜能，但它们造成传播和感染家庭成员或健康护理工作人员的风险。尽管存在潜在的安全性问题，但能够复制的人腺病毒已成功用于针对呼吸道疾病进行免疫。将几十万的美国新兵用配制为肠溶包衣的胶囊或片剂的全病毒人Ad4、Ad7和Ad21的活的未减毒分离株针对急性呼吸道疾病进行有效且安全地接种疫苗(Cancer Gene Therapy (2004) 11:819)。

已经描述了人和犬的能够复制的载体(Vaccine (2002) 20:3485)，然而，尚未发现猿猴的能够复制的腺病毒载体能够递送免疫原或治疗剂用于预防或治疗疾病。这种载体将组合有效的能够复制的载体的优点与猿猴腺病毒的优点。同样，尽管猿猴载体具有在人细胞中复制的能力，但它们的复制没有在猿猴细胞中那么好，因此它们的功效与猿猴中的功效相比减弱。因此，在本领域中需要组合有效复制和在人中没有预先存在的免疫力的优点的载体。

发明概述

与复制缺陷的猿猴腺病毒载体相比，本发明的能够复制的猿猴腺病毒载体生成更强的基于基因的疫苗应答。已经对本发明的载体进行优化，以提供改进的体内功效，同时维持适合于人免疫的安全性谱。它们具有固有地强的免疫调节性骨架和能够驱动强且持续的转基因表达的启动子。本发明的能够复制的载体可用作免疫原性组合物的组分，其用于诱导受试者中的免疫应答，其在治疗中的使用方法和制造方法。

本发明提供了能够复制的猿猴腺病毒载体，其含有包含启动子和转基因的表达盒，其中所述表达盒被插入载体的E3区域、HE1位点或HE2位点中。

本发明还提供了使用这种能够复制的猿猴腺病毒载体在有此需要的受试者中诱导针对由病原体引起的疾病的免疫应答的方法。

在一个实施方案中，所述猿猴是黑猩猩。所述载体可以是ChAd155或ChAd83。

能够复制的黑猩猩腺病毒可以进一步包含编码黑猩猩腺病毒纤突多肽或其功能衍生物和/或黑猩猩腺病毒E4区域的核苷酸序列。

所述启动子可以选自CASI启动子和增强的巨细胞病毒启动子。在一些实施方案中，所述表达盒可以进一步包含转录后调节元件。在一个实施方案中，所述转录后调节元件是土拨鼠肝炎转录后调节元件。