[发明专利]通过单向双重探针引物延伸的靶标富集

权利要求书

1.用于富集核酸文库中的至少一种靶标核酸的方法，所述方法包括：

将第一寡核苷酸与核酸文库中的靶标核酸杂交，所述核酸文库中的核酸各自具有包含第一衔接子的第一末端和包含第二衔接子的第二末端；

用第一聚合酶延伸杂交的第一寡核苷酸，由此产生包含所述靶标核酸和延伸的第一寡核苷酸的第一引物延伸复合物；

捕获所述第一引物延伸复合物；

相对于所述核酸文库富集所述第一引物延伸复合物；

将第二寡核苷酸与所述靶标核酸杂交；

用第二聚合酶延伸杂交的第二寡核苷酸，由此产生包含所述靶标核酸和延伸的第二寡核苷酸的第二引物延伸复合物，由此从所述第一引物延伸复合物释放延伸的第一寡核苷酸；和

用第三聚合酶、第一扩增引物和第二扩增引物扩增所述靶标核酸，所述第一扩增引物具有与所述第一衔接子互补的3’末端，且所述第二扩增引物具有与所述第二衔接子互补的3’末端。

2.权利要求1的方法，其进一步包括对扩增的靶标核酸进行测序。

3.权利要求1的方法，其中所述第一寡核苷酸包含捕获部分。

4.权利要求1的方法，在将所述第一寡核苷酸与靶标核酸杂交之前，将所述第一寡核苷酸与固相支持物结合，且其中将所述第一寡核苷酸与所述靶标核酸杂交和用聚合酶延伸杂交的第一寡核苷酸，由此将所述第一引物延伸复合物捕获在所述固体支持物上。

5.权利要求1的方法，其进一步包括将至少一个修饰的核苷酸并入所述第一引物延伸复合物中的延伸的第一寡核苷酸和所述第二引物延伸复合物中的延伸的第二寡核苷酸中的至少一个。

6.权利要求1的方法，其进一步包括将至少一个修饰的核苷酸并入所述第一引物延伸复合物中的延伸的第一寡核苷酸，所述至少一个修饰的核苷酸具有捕获部分。

7.权利要求1的方法，其进一步包括将至少一个尿嘧啶并入以下中的至少一个中：

所述第一引物延伸复合物中的延伸的第一寡核苷酸，和

所述第二引物延伸复合物中的延伸的第二寡核苷酸，

由此形成含有尿嘧啶的寡核苷酸产物。

8.权利要求1的方法，其进一步包括使所述核酸文库与阻断寡核苷酸接触。

9.权利要求1的方法，其中所述第一衔接子和所述第二衔接子是分叉的衔接子。

10.权利要求1的方法，其中所述第一衔接子和所述第二衔接子包含至少一个尿嘧啶。

11.权利要求1的方法，其中所述第二寡核苷酸在所述第一寡核苷酸的5’位置处与所述靶标核酸杂交。

12.权利要求1的方法，其中所述第一衔接子、所述第二衔接子、所述第一扩增引物和所述第二扩增引物中的至少一种包含独特标识符(UID)序列、分子标识符(MID)序列中的至少一种。

13.用于富集核酸文库中的至少一种靶标核酸的试剂盒，所述试剂盒包含：

与核酸文库中的靶标核酸互补的第一寡核苷酸，所述核酸文库中的核酸各自具有包含第一衔接子的第一末端和包含第二衔接子的第二末端；

与所述靶标核酸互补的第二寡核苷酸；

第一扩增引物；和

第二扩增引物，

其中所述第一寡核苷酸包含捕获部分，

其中所述第二寡核苷酸在所述第一寡核苷酸的5’位置处与所述靶标核酸杂交，且

其中所述第一扩增引物具有与所述第一衔接子互补的3’末端，且所述第二扩增引物具有与第二衔接子互补的3’末端。