[发明专利]免疫刺激寡核苷酸

说明书

提供了用于刺激toll‑样受体9（TLR9）的组合物和方法。更特别地，本文公开了免疫刺激寡核苷酸，增强寡核苷酸的免疫刺激性质的方法和引起免疫应答的方法。

与相关申请的参考

本申请要求各自于2017年12月15日提交的欧洲专利申请Nos. EP17207740.6、EP17207746.3和EP17207750.5的优先权和利益，其公开内容整体引入本文作为参考。

序列表

本申请含有已以ASCII格式电子提交且特此整体引入作为参考的序列表。于2018年11月27日创建的所述ASCII副本名称为103976.000119 SEQ LISTING_ST25.txt且大小为2,233字节。

发明领域

提供了用于刺激toll-样受体9（TLR9）的组合物和方法。更特别地，本文公开了免疫刺激寡核苷酸，增强寡核苷酸的免疫刺激性质的方法和引起免疫应答的方法。

发明背景

抗生素抗性是消极地影响许多产业的全球性问题。二甲氧基苯青霉素抗性的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）（MRSA）和其他“超级病菌（super bugs）”正在医院和医生办公室内造成严重破坏，从而使得到卫生中心的出诊/就诊可能是致死性的。农业产业也遭遇类似的问题。由于有限的空间和非无菌环境，整个畜群都处在致病性感染的危险中。例如，一头非常接近其畜群的患病的牛可以指数规律地增加发病率和死亡率。尽管存在感染的风险，但由于成本增加以及消费者要求未暴露于抗生素的肉类和乳制品，抗生素治疗正变得更不得人心。而且那些的确使用抗生素疗法的生产者理解，即使广谱抗生素也不能完全有效地对抗可能与畜群接触的每种病原体。

因此，存在用于治疗或预防动物中感染的非基于抗生素的疗法的需要。所公开的组合物和方法以这些和其他重要需要为目标。

发明概述

本文公开了包含至少一个CpG基序和3'胆固醇基部分的免疫刺激寡核苷酸。

本文还提供了包含免疫刺激寡核苷酸的免疫刺激组合物。

还公开了用于增强TLR9配体的免疫原性的方法，包括经由接头将胆固醇基部分附着至TLR9配体的3'末端，其中TLR9配体是具有至少一个CpG基序的寡核苷酸。

还提供了用于在主体中引起TLR9-介导的免疫应答的方法，包括向所述主体施用本文所述的免疫刺激寡核苷酸或免疫刺激组合物中的任一种。

附图简述

当连同附图一起阅读时，将进一步理解所述概述以及以下的详述。为了举例说明所公开的组合物和方法起见，在附图中示出了所述组合物和方法的示例性实施方案；然而，所述组合物和方法不限于所公开的具体实施方案。在附图中：

图1描述了附着至己二醇接头的胆固醇基部分的化学结构。

图2A和2B比较了寡核苷酸PTO-2006、具有3’ TTTTGGGGGTTTT（SEQ ID NO：9）序列的寡核苷酸PDE-2006（“2006-3dT4G5T4”）和具有图1所示的经由己二醇接头附着的3'胆固醇基部分的寡核苷酸2006-3dT4G5T4（“2006-3dT4G5T43C”）在HEKBlue-hTLR9细胞中的TLR9刺激活性。

图3描述了具有3'TTTT序列的寡核苷酸PDE-2006（“2006-T4-PDE”）和具有经由图1的己二醇接头附着到寡核苷酸的3'末端的胆固醇基部分的寡核苷酸2006-T4-PDE（“3Chol-2006-T4-PDE”）在HEKBlue-hTLR9细胞中引起TLR9-介导的免疫应答的能力。

图4A和4B比较了寡核苷酸2006-3dT4G5T4和寡核苷酸2006-3dT4G5T4C的TLR9刺激特征。