[发明专利]动物细胞、动物细胞的制造方法及靶蛋白的制造方法在审
| 申请号： | 201880079952.3 | 申请日： | 2018-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN111465686A | 公开（公告）日： | 2020-07-28 |
| 发明（设计）人： | 松浦达也;石原司 | 申请（专利权）人： | 富士胶片株式会社 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/53;C12P21/02 |
| 代理公司： | 永新专利商标代理有限公司 72002 | 代理人： | 王灵菇 |
| 地址： | 日本*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 动物 细胞 制造 方法 蛋白 | ||
1.一种动物细胞，其具有编码靶蛋白的基因和编码异戊酰辅酶A脱氢酶的外源基因且异戊酰辅酶A脱氢酶过表达。
2.根据权利要求1所述的动物细胞，其中，
编码异戊酰辅酶A脱氢酶的外源基因与启动子连接。
3.根据权利要求1或2所述的动物细胞，其中，
动物细胞为CHO细胞。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的动物细胞，其中，
异戊酰辅酶A脱氢酶的表达量相对于不具有编码异戊酰辅酶A脱氢酶的外源基因的所述动物细胞为3倍以上。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的动物细胞，其中，
编码靶蛋白的基因和编码异戊酰辅酶A脱氢酶的外源基因存在于同一表达载体上。
6.一种权利要求1至5中任一项所述的动物细胞的制造方法，其包括如下工序：
对动物细胞导入编码靶蛋白的基因和编码异戊酰辅酶A脱氢酶的外源基因。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，
导入编码异戊酰辅酶A脱氢酶的外源基因的工序通过电穿孔来进行。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其中，
使用包含编码靶蛋白的基因和编码异戊酰辅酶A脱氢酶的外源基因的同一表达载体来导入编码靶蛋白的基因和编码异戊酰辅酶A脱氢酶的外源基因。
9.一种靶蛋白的制造方法，其包括如下步骤：
培养权利要求1至5中任一项所述的动物细胞。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，
动物细胞的培养为补料分批培养或分批培养。
11.根据权利要求10所述的方法，其中，
细胞培养的接种细胞密度为0.2×106cells/mL以上且5×106cells/mL以下。
12.根据权利要求10或11所述的方法，其中，
培养期间中的活细胞率在整个期间为60％以上。
13.根据权利要求10至12中任一项所述的方法，其中，
通过了培养期间的培养液中的异戊酸的最大浓度为3000μmol/L以下。
14.根据权利要求10至13中任一项所述的方法，其中，
通过了培养期间的每个细胞的异戊酸分泌量为30fmol/细胞/天以下。
15.根据权利要求10至14中任一项所述的方法，其中，
通过了培养期间的培养液中的丁酸的最大浓度为3000μmol/L以下。
16.根据权利要求10至15中任一项所述的方法，其中，
通过了培养期间的每个细胞的丁酸分泌量为30fmol/细胞/天以下。
17.根据权利要求9所述的方法，其中，
动物细胞的培养为灌注培养。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，
细胞培养的接种细胞密度为0.2×106cells/mL以上且3×107cells/mL以下。
19.根据权利要求17或18所述的方法，其中，
培养期间中的活细胞率在整个期间为90％以上。
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