[发明专利]用于A型血友病基因编辑的组合物和方法

权利要求书

1.一种系统，该系统包含：

脱氧核糖核酸(DNA)内切核酸酶或编码所述DNA内切核酸酶的核酸；

包含来自SEQ ID NO:22、21、28、30、18-20、23-27、29、31-44和104中任一个的间隔区序列的指导RNA(gRNA)；以及

包含编码因子VIII(FVIII)蛋白或其功能衍生物的核酸序列的供体模板。

2.如权利要求1所述的系统，其中该gRNA包含来自SEQ ID NO:22、21、28和30中任一个的间隔区序列。

3.如权利要求2所述的系统，其中该gRNA包含来自SEQ ID NO:22的间隔区序列。

4.如权利要求2所述的系统，其中该gRNA包含来自SEQ ID NO:21的间隔区序列。

5.如权利要求2所述的系统，其中该gRNA包含来自SEQ ID NO:28的间隔区序列。

6.如权利要求2所述的系统，其中该gRNA包含来自SEQ ID NO:30的间隔区序列。

7.如权利要求1-6中任一项所述的系统，其中所述DNA内切核酸酶选自由以下组成的组：Cas1、Cas1B、Cas2、Cas3、Cas4、Cas5、Cas6、Cas7、Cas8、Cas9(也称为Csn1和Csx12)、Cas100、Csy1、Csy2、Csy3、Cse1、Cse2、Csc1、Csc2、Csa5、Csn2、Csm2、Csm3、Csm4、Csm5、Csm6、Cmr1、Cmr3、Cmr4、Cmr5、Cmr6、Csb1、Csb2、Csb3、Csx17、Csx14、Csx10、Csx16、CsaX、Csx3、Csx1、Csx15、Csf1、Csf2、Csf3、Csf4或Cpf1内切核酸酶或其功能衍生物。

8.如权利要求1-7中任一项所述的系统，其中所述DNA内切核酸酶是Cas9。

9.如权利要求1-8中任一项所述的系统，其中对该编码所述DNA内切核酸酶的核酸进行密码子优化以在宿主细胞中表达。

10.如权利要求1-9中任一项所述的系统，其中对该编码因子VIII(FVIII)蛋白或其功能衍生物的核酸序列进行密码子优化以在宿主细胞中表达。

11.如权利要求1-10中任一项所述的系统，其中该编码所述DNA内切核酸酶的核酸是脱氧核糖核酸(DNA)。

12.如权利要求1-10中任一项所述的系统，其中该编码所述DNA内切核酸酶的核酸是核糖核酸(RNA)。

13.如权利要求12所述的系统，其中该编码所述DNA内切核酸酶的RNA是mRNA。

14.如权利要求1-13中任一项所述的系统，其中该供体模板是在腺相关病毒(AAV)载体中编码的。

15.如权利要求14所述的系统，其中该供体模板包含供体盒，该供体盒包含该编码因子VIII(FVIII)蛋白或功能衍生物的核酸序列，并且其中该供体盒在一侧或两侧侧翼有gRNA靶位点。

16.如权利要求15所述的系统，其中该供体盒的两侧侧翼有gRNA靶位点。

17.如权利要求15或16所述的系统，其中该gRNA靶位点是该系统中gRNA的靶位点。

18.如权利要求17所述的系统，其中该供体模板的gRNA靶位点是该系统中gRNA的基因组gRNA靶位点的反向互补序列。