[发明专利]工程化的葡糖基转移酶

权利要求书

1.一种非天然葡糖基转移酶，所述非天然葡糖基转移酶在与SEQ ID NO：62的氨基酸残基Gln-588、Phe-607、或Arg-741相对应的位置处包含至少两个氨基酸取代，

其中所述非天然葡糖基转移酶合成包含1，3-键的α-葡聚糖，并且

其中所述非天然葡糖基转移酶具有：

(i)比第二葡糖基转移酶的α-葡聚糖产率更高的α-葡聚糖产率，所述第二葡糖基转移酶仅在取代位置处与所述非天然葡糖基转移酶不同，和/或

(ii)比所述第二葡糖基转移酶的明串珠菌二糖产率更低的明串珠菌二糖产率。

2.权利要求1的非天然葡糖基转移酶，其中所述葡糖基转移酶在与SEQ ID NO：62的氨基酸残基Gln-588、Phe-607、或Arg-741相对应的位置处包含氨基酸取代。

3.权利要求1的非天然葡糖基转移酶，其中：

(i)在与氨基酸残基Gln-588相对应的位置处的氨基酸被Leu、Ala、或Val残基取代；

(ii)在与氨基酸残基Phe-607相对应的位置处的氨基酸被Trp、Tyr或Asn残基取代；和/或

(iii)在与氨基酸残基Arg-741相对应的位置处的氨基酸被Ser或Thr残基取代。

4.权利要求1的非天然葡糖基转移酶，其中所述葡糖基转移酶在与SEQ ID NO：62的氨基酸残基Ala-510和/或Asp-948相对应的位置处进一步包含至少一个氨基酸取代；

任选地，其中：

(i)在与氨基酸残基Ala-510相对应的位置处的氨基酸被Asp、Glu、Ile、或Val残基取代；和/或

(ii)在与氨基酸残基Asp-948相对应的位置处的氨基酸被Gly、Val、或Ala残基取代。

5.权利要求1的非天然葡糖基转移酶，其中所述葡糖基转移酶在与SEQ ID NO：62的氨基酸残基Ser-631、Ser-710、Arg-722、和/或Thr-877相对应的位置处进一步包含至少一个氨基酸取代；

任选地，其中：

(i)在与氨基酸残基Ser-631相对应的位置处的氨基酸被Thr、Asp、Glu或Arg残基取代；

(ii)在与氨基酸残基Ser-710相对应的位置处的氨基酸被Gly、Ala、或Val残基取代；

(iii)在与氨基酸残基Arg-722相对应的位置处的氨基酸被His或Lys残基取代；和/或

(iv)在与氨基酸残基Thr-877相对应的位置处的氨基酸被Lys、His、或Arg残基取代。

6.权利要求1的非天然葡糖基转移酶，其中所述葡糖基转移酶在与SEQ ID NO：62的氨基酸残基Val-1188、Met-1253、和/或Gln-957相对应的位置处进一步包含至少一个氨基酸取代；

任选地，其中：

(i)在与氨基酸残基Val-1188相对应的位置处的氨基酸被Glu或Asp残基取代；

(ii)在与氨基酸残基Met-1253相对应的位置处的氨基酸被Ile、Leu、Ala、或Val残基取代；和/或

(iii)在与氨基酸残基Gln-957相对应的位置处的氨基酸被Pro残基取代。

7.权利要求1的非天然葡糖基转移酶，其中所述α-葡聚糖是不溶性的并且包含至少约50％的α-1，3键，并且任选地其中所述α-葡聚糖具有至少100的重均聚合度(DP_w)。

8.权利要求7的非天然葡糖基转移酶，所述非天然葡糖基转移酶包含与SEQ ID NO：4的残基55-960、SEQ ID NO：65的残基54-957、SEQ ID NO：30的残基55-960、SEQ ID NO二28的残基55-960、或SEQ ID NO：20的残基55-960具有至少约90％同一性的催化结构域。