[发明专利]工程化的葡糖基转移酶

权利要求书

1.一种非天然葡糖基转移酶，所述非天然葡糖基转移酶在与SEQ ID NO：62的氨基酸残基Asn-531、Arg-534、Thr-563、Glu-567、Val-586、Gln-588、Ile-591、Lys-593、Ile-608、Ala-610、Leu-661、Arg-722、Thr-728、Met-732、Arg-741、Asn-743、Ala-777、Tyr-848或Ile-1453相对应的位置处包含至少一个氨基酸取代，

其中所述非天然葡糖基转移酶合成包含1，3-键的不溶性α-葡聚糖，并且所述不溶性α-葡聚糖的分子量高于由第二葡糖基转移酶合成的不溶性α-葡聚糖的分子量，所述第二葡糖基转移酶仅在一个或多个取代位置处不同于所述非天然葡糖基转移酶。

2.权利要求1的非天然葡糖基转移酶，其中：

(i)在与氨基酸残基Asn-531相对应的位置处的氨基酸被Gly、Leu或Met残基取代；

(ii)在与氨基酸残基Arg-534相对应的位置处的氨基酸被Lys、Gly、Ile、Leu或Met残基取代；

(iii)在与氨基酸残基Thr-563相对应的位置处的氨基酸被Ala残基取代；

(iv)在与氨基酸残基Glu-567相对应的位置处的氨基酸被Gln残基取代；

(v)在与氨基酸残基Val-586相对应的位置处的氨基酸被Thr残基取代；

(vi)在与氨基酸残基Gln-588相对应的位置处的氨基酸被Leu残基取代；

(vii)在与氨基酸残基Ile-591相对应的位置处的氨基酸被Val、Lys或Arg残基取代；

(viii)在与氨基酸残基Lys-593相对应的位置处的氨基酸被Met残基取代；

(ix)在与氨基酸残基Ile-608相对应的位置处的氨基酸被Tyr残基取代；

(x)在与氨基酸残基Ala-610相对应的位置处的氨基酸被Cys或Thr残基取代；

(xi)在与氨基酸残基Leu-661相对应的位置处的氨基酸被Pro残基取代；

(xii)在与氨基酸残基Arg-722相对应的位置处的氨基酸被His或Asn残基取代；

(xiii)在与氨基酸残基Thr-728相对应的位置处的氨基酸被Ser残基取代；

(xiv)在与氨基酸残基Met-732相对应的位置处的氨基酸被Leu残基取代；

(xv)在与氨基酸残基Arg-741相对应的位置处的氨基酸被Ser、Ala、Pro、Gln或Thr残基取代；

(xvi)在与氨基酸残基Asn-743相对应的位置处的氨基酸被Ser、Thr或Asp残基取代；

(xvii)在与氨基酸残基Ala-777相对应的位置处的氨基酸被Asn残基取代；

(xviii)在与氨基酸残基Tyr-848相对应的位置处的氨基酸被Glu残基取代；和/或

(xix)在与氨基酸残基Ile-1453相对应的位置处的氨基酸被Gly或Met残基取代。

3.权利要求1的非天然葡糖基转移酶，所述非天然葡糖基转移酶在与SEQ ID NO：62的氨基酸残基Gln-588、Arg-741或Arg-722相对应的位置处包含至少一个氨基酸取代；任选地，其中：

(i)在与氨基酸残基Gln-588相对应的位置处的氨基酸被Leu残基取代；

(ii)在与氨基酸残基Arg-741相对应的位置处的氨基酸被Ser残基取代；和/或

(iii)在与氨基酸残基Arg-722相对应的位置处的氨基酸被His残基取代。

4.权利要求3的非天然葡糖基转移酶，所述非天然葡糖基转移酶在与SEQ ID NO：62的氨基酸残基Gln-588、Arg-741或Arg-722相对应的位置处包含两个或更多个氨基酸取代。

5.权利要求1的非天然葡糖基转移酶，其中所述不溶性α-葡聚糖包含至少约50％的α-1，3键，并且任选地其中所述不溶性α-葡聚糖具有至少100的重均聚合度(DP_w)。

6.权利要求5的非天然葡糖基转移酶，其中所述不溶性α-葡聚糖具有至少650的DP_w。