[发明专利]三Fab-康特斯体

权利要求书

1.一种多特异性抗体，其包含三个抗原结合位点且由两个环形融合多肽组成，其中

a)第一环形融合多肽包含第一结合结构域的第一部分、第一结合结构域的第二部分及第三结合结构域的第一部分，其中

该第一结合结构域的该第一部分直接或经由第一肽接头与该第三结合结构域的该第一部分的N端融合，

该第一结合结构域的该第二部分直接或经由第二肽接头与该第三结合结构域的该第一部分的C端融合，

该第一结合结构域的该第一部分是重链Fab片段(VH1-CH1)或轻链Fab片段(VL1-CL1)，其中如果该第一结合结构域的该第一部分是重链Fab片段，则该第一结合结构域的该第二部分是轻链Fab片段，或反之亦然，且

该第一结合结构域的该第一部分及该第一结合结构域的该第二部分彼此缔合且一起形成第一抗原结合位点，

b)第二环形融合多肽包含第二结合结构域的第一部分、第二结合结构域的第二部分及该第三结合结构域的第二部分，其中

该第二结合结构域的该第一部分直接或经由第三肽接头与该第三结合结构域的该第二部分的N端融合，

该第二结合结构域的该第二部分直接或经由第四肽接头与该第三结合结构域的该第二部分的C端融合，

该第二结合结构域的该第一部分是重链Fab片段(VH2-CH1)或轻链Fab片段(VL2-CL1)，其中如果该第二结合结构域的该第一部分是重链Fab片段，则该第二结合结构域的该第二部分是轻链Fab片段，或反之亦然，

该第二结合结构域的该第一部分及该第二结合结构域的该第二部分彼此缔合且一起形成第二抗原结合位点，

c)该第三结合结构域的该第一部分及该第三结合结构域的该第二部分一起形成第三抗原结合位点，其中

该第三结合结构域的该第一部分是可变重链CH3结构域融合多肽(VH3-CH3)或可变轻链CH3结构域融合多肽(VL3-CH3)，

如果该第二结合结构域的该第一部分是可变轻链CH3结构域融合多肽，则该第三结合结构域的该第二部分为可变重链CH3结构域融合多肽，或反之亦然，

该第三结合结构域的该第一部分及该第三结合结构域的该第二部分彼此缔合且形成该第三抗原结合位点，

其中两个恒定重链结构域3(CH3)通过以下而改变以促进异二聚：

i)通过至少一个原始氨基酸残基经侧链体积大于该原始氨基酸残基的氨基酸残基取代在所述CH3结构域中的一者中产生隆凸，及通过至少一个原始氨基酸残基经侧链体积小于该原始氨基酸残基的氨基酸残基取代在所述CH3结构域中的另一者中产生空腔，以使得在所述CH3结构域中的一者中产生的该隆凸可定位于所述CH3结构域中的另一者中产生的该空腔中，或

所述CH3结构域中的一者中的至少一个原始氨基酸残基经带正电氨基酸取代，及所述CH3结构域中的另一者中的至少一个原始氨基酸残基经带负电氨基酸取代，或

ii)在各CH3结构域中引入至少一个半胱氨酸残基，以使得在所述CH3结构域之间形成二硫键，或

iii)i)和ii)这两种修饰，

其中该多特异性抗体不含恒定重链结构域2(CH2)及铰链区。

2.根据权利要求1所述的多特异性抗体，其中所述第一和/或所述第二和/或所述第三抗原结合位点彼此独立地通过在以下位置引入半胱氨酸残基以在VH结构域与VL结构域之间形成二硫键而二硫键稳定(根据Kabat编号)：

VH位置44处及VL位置100处，

VH位置105处及VL位置43处，或

VH位置101处及VL位置100处。

3.根据权利要求1或2所述的多特异性抗体，其中所述第一、第二、第三及第四肽接头是至少5个氨基酸的肽。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的多特异性抗体，其中所述第一及第三肽接头具有SEQ ID NO:38的氨基酸序列；且所述第二及第四肽接头具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的多特异性抗体，其中所述VH3结构域的C端直接连接至所述CH3结构域中一者的N端，且所述VL3结构域的C端直接连接至所述CH3结构域中另一者的N端。