[发明专利]并入有跨膜蛋白的囊泡

说明书

本发明涉及并入有跨膜蛋白的囊泡，其中囊泡形成材料包含聚(乙二醇)‑嵌段‑聚(丙二醇)‑嵌段‑聚(乙二醇)和聚醚胺的混合物。根据本发明的囊泡通常经受高温而直径没有明显收缩，这反过来导致维持透水性几乎不受影响。基于Pluronic的囊泡在表面上具有大量可用的氨基基团，由较大的zeta电位值所说明，其可用于通过与三苯甲酰氯(TMC)的化学反应在聚酰胺层中交联。

技术领域

本公开涉及并入有跨膜蛋白的囊泡，制备并入有跨膜蛋白的囊泡的方法，包含并入有跨膜蛋白的囊泡的分离膜，以及在多孔基质膜上制备固定了并入有跨膜蛋白的囊泡的薄膜复合物层的方法。

背景技术

聚合物囊泡或聚合囊泡是由两亲性嵌段共聚物在合适的溶剂(例如水)中形成的自组装结构，并呈现出由双层壁包围的内部空腔，该双层壁可以并入各种结构，如跨膜蛋白。聚合物囊泡的稳定性随形成聚合物的分子量的增加而增加，并且其渗透性随亲水与疏水比的增加而增加。聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯(PEO-PPO-PEO)的嵌段共聚物，通常被称为Pluronic，其具有低的亲水与疏水比，可形成囊泡，并因此适用于获得可渗透膜。不幸的是，它们不容易通过直接溶解自组装。在微流体装置中组装更为合适(Débora F.doNascimento et al,Microfluidic Fabrication of Pluronic Vesicles withControlled Permeability Langmuir 2016,32,5350-5355)。此外，已知具有非常高的PPO/PEO比(例如68/10)的Pluronics自组装成约100nm的囊泡结构，其并不是非常稳定。即使通过聚合的季戊四醇四丙烯酸酯(PETA)的永久互穿网络(IPN)稳定时，它们的保质期也不会超过一个月。(Feng Li,Pluronic polymersomes stabilized by core cross-linkedpolymer micelles,Soft Matter,2009,5,4042–4046)。

具有小PPO/PEO比的Pluronics可在阴离子表面活性剂或无机盐(如十二烷基硫酸钠或NaF)存在下自组装，形成约800nm最大至3000nm的结构。(Li,F.；Ketelaar,T.；Marcelis,A.T.M.；Leermakers,F.A.M.；Stuart,M.A.C.；Sudholter,E.J.R.,Stabilization of polymersome vesicles by an interpenetrating polymernetwork.Macromolecules 2007,40(2),329-333.；Chen,S.；Yang,B.；Guo,C.；Ma,J.H.；Yang,L.R.；Liang,X.F.；Hua,C.；Liu,H.Z.,Spontaneous Vesicle Formation of Poly(ethylene oxide)-Poly(propylene oxide)-Poly(ethylene oxide)TriblockCopolymer.Journal of Physical Chemistry B 2008,112(49),15659-15665.)。

Pluronics被认为是无毒的，且已广泛用于药物递送系统，并为基因治疗提供了令人兴奋的机会。(Feng Li,Pluronic polymersomes stabilized by core cross-linkedpolymer micelles,Soft Matter,2009,5,4042–4046)。许多研究已表明了当与广谱抗原一起使用时Pluronics作为佐剂提高细胞介导和抗体介导的免疫应答的潜在用途(Jain-Gupta N,et al,Pluronic P85 enhances the efficacy of outer membrane vesiclesas a subunit vaccine against Brucella melitensis challenge in mice,FEMSImmunol Med Microbiol 66(2012)436–444)。