[发明专利]用于分化间充质干细胞的方法

权利要求书

1.从间充质干细胞(MSC)获得MSC衍生的细胞的方法，包括使MSC在体外或离体与成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)、转化生长因子β(TGFβ)和浓度至少为0.01IU/ml的肝素或其衍生物或类似物接触。

2.根据权利要求1所述的方法，包括以下步骤：

(a)在包含FGF-2、TGFβ和浓度为至少0.01IU/ml的肝素或者其衍生物或类似物的培养基中培养从受试者的生物样品中回收的MSC；

(b)去除非贴壁物质，并在含有FGF-2、TGFβ和浓度至少为0.01IU/ml的肝素或其衍生物或类似物的培养基中进一步培养贴壁细胞，从而获得所述MSC衍生的细胞。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中TGFβ选自TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、以及它们的混合物；优选地，其中TGFβ是TGFβ1。

4.用于从MSC获得具有改善的移植特性的MSC衍生的细胞的方法，该方法包括尺寸减小步骤，其中所述尺寸减小步骤的特征在于使MSC或MSC衍生的细胞在体外或离体与浓度为至少0.01IU/ml的肝素或其衍生物或类似物接触。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中：

-肝素或其衍生物或类似物的浓度为至少0.05IU/ml，优选约0.1IU/ml；和/或

-肝素或肝素衍生物或其类似物，选自未分级的肝素(UFH)；低分子量肝素(LMWH)，如依诺肝素(enoxaparin)、达肝素(dalteparin)、那屈肝素(nadroparin)、亭扎肝素(tinzaparin)、舍托肝素(certoparin)、瑞肝素(reviparin)、阿地肝素(ardeparin)、帕肝素(parnaparin)、贝米肝素(bemiparin)或其混合物；类肝素(heparinoid)，比如硫酸乙酰肝素、硫酸皮肤素、硫酸软骨素、硫酸acharan、硫酸角质素或其混合物，如达那肝素(danaparoid)；肝素盐；类肝素盐；肝素片段；类肝素片段；和它们的混合物。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中悬浮液中至少60％的所述MSC衍生的细胞具有等于或小于25μm的直径(D₆₀≤25μm)，和其中悬浮液中至多5％的所述MSC衍生的细胞具有大于35μm的直径。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述MSC衍生的细胞是骨成软骨细胞谱系，优选成骨细胞谱系。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中另外使所述MSC或MSC衍生的细胞接触以下一种或多种，例如其中所述培养基另外包含以下一种或多种：血浆，血清或其替代物。

9.从MSC获得MSC衍生的细胞的方法，包括在体外或离体使MSC与FGF-2、TGFβ和肝素或其衍生物或类似物接触，其中悬浮液中至少60％的所述MSC衍生的细胞具有等于或小于25μm的直径(D₆₀≤25μm)，和其中悬浮液中至多5％的所述MSC衍生的细胞具有大于35μm的直径。

10.根据权利要求9所述的方法，其中：

-使MSC与浓度为至少0.01IU/ml的肝素或其衍生物或类似物接触；和/或

-TGFβ选自TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3及其混合物；优选地，其中TGFβ是TGFβ1。

11.通过MSC的体外或离体扩充能获得的MSC衍生的细胞群体，其中悬浮液中至少60％的所述MSC衍生的细胞具有等于或小于25μm的直径(D₆₀≤25μm)，并且其中悬浮液中至多5％的所述MSC衍生的细胞具有大于35μm的直径。