[发明专利]中和性抗体的高通量筛选方法、由该方法制备的中和性抗体，以及其用途

权利要求书

1.一种用以高通量筛选一对一病毒具有专一性的中和性抗体的方法，包含：

(a)提供一噬菌体表达的单链可变片段抗体库，其包含复数个噬菌体表达的scFv，其中各噬菌体表达的scFv的重链可变区对蛋白A具有结合亲和力，且各噬菌体表达的scFv的轻链可变区对蛋白L具有结合亲和力；

(b)使步骤(a)的噬菌体表达的scFv抗体库曝露于一源自该病毒的病毒抗原；

(c)于一酸性环境中，由步骤(b)的噬菌体表达的scFv抗体库筛选复数个噬菌体，其会表达与该病毒抗体具有结合亲和力的scFv；

(d)分别使步骤(c)筛选的该复数个噬菌体表达复数个可溶形式的scFv；

(e)使步骤(d)的该复数个可溶形式的scFv曝露于该病毒；

(f)分别决定步骤(e)的该复数个可溶形式的scFv的中和效力；以及

(g)基于步骤(f)决定的结果，筛选一可溶形式的scFv作为该中和性抗体，其相对于该复数个可溶形式scFv中其他可溶形式的scFv具有较佳的中和效力。

2.如权利要求1所述的方法，其中该病毒可以是流感病毒、麻疹病毒、冠状病毒、腮腺炎病毒、马堡病毒、伊波拉病毒、德国麻疹病毒、鼻病毒、小儿麻痹病毒、肝炎病毒、天花病毒、水痘-带状疱疹病毒、严重急性呼吸综合症病毒、反转录病毒、轮状病毒、腺病毒、腺相关病毒或阿尔法病毒。

3.如权利要求2所述的方法，其中该病毒是该流感病毒。

4.如权利要求3所述的方法，其中该病毒抗原是血球凝集素或神经氨酸酶。

5.如权利要求3所述的方法，其中步骤(c)是以一pH值介于5.0-7.0的缓冲液来处理步骤(b)的产物。

6.如权利要求5所述的方法，其中该缓冲液的pH值为5.0。

7.一种中和性抗体，包含：

一VL域，其氨基酸序列至少85％相似于SEQ ID NO：1-28的任一序列；以及

一VH域，其氨基酸序列至少85％相似于SEQ ID NO：29-56的任一序列。

8.如权利要求7所述的中和性抗体，其中

该VL域具有SEQ ID NO：1-28的任一氨基酸序列；以及

该VH域具有SEQ ID NO：29-56的任一氨基酸序列。

9.如权利要求7所述的中和性抗体，其中以权利要求1所述的方法来制备该抗体。

10.一种用以制备一重组抗体的方法，包含：

(a)以权利要求1所述的方法筛选一中和性抗体；

(b)萃取一噬菌粒DNA，其对应于该会表达步骤(a)的中和性抗体的噬菌体；

(c)以步骤(b)的噬菌粒DNA作为模板，利用聚合酶链式反应分别扩增一用以编码一VL域的第一核酸序列，以及一用以编码一VH域的第二核酸序列；

(d)将该第一及第二核酸序列插入一表达载体中，其包含一第三及一第四核酸序列，其中该第三核酸序列用以编码一免疫球蛋白的轻链恒定域(light chain constant domain,CL domain)，且该第四核酸序列用以编码该免疫球蛋白的重链恒定域(heavy chainconstant domain,CH domain)；以及

(e)将步骤(d)的该包含该第一、第二、第三及第四核酸序列的表达载体转染至一宿主细胞，以制备该重组抗体。

11.如权利要求10所述的方法，其中该第一核酸序列是位于该第三核酸序列的上游，且该第二核酸序列是位于该第四核酸序列的上游。

12.如权利要求10所述的方法，其中该免疫球蛋白是免疫球蛋白G。

13.如权利要求10所述的方法，其中该宿主细胞是一哺乳动物细胞。