[发明专利]关于抗体的复制保护

说明书

本发明涉及包含抗体和标签的抗体缀合物及其用途，其中存在于抗体中的一种或多种元素显示出与所述一种或多种元素的自然存在的同位素比率不同的同位素比率，其中自然界中的稀有同位素的量增加至抗体中的相应元素原子的至少4%。

发明领域

本发明涉及包含抗体和标签的抗体缀合物及其用途，其中存在于抗体中的一种或多种元素显示出与所述一种或多种元素的自然存在的同位素比率不同的同位素比率，其中自然界中的稀有同位素的量增加至抗体中的相应元素原子的至少4%。

背景

蛋白质特别是抗体的一级氨基酸序列（包括共价连接的修饰）可以使用质谱法容易地测定（Applications of liquid chromatography coupled to mass spectrometry-basedmetabolomics in clinical chemistry and toxicology: A review，2011，第44卷，第1期，第119-135页，特刊）。一般，执行下述步骤：a）分离靶；b）用产生多种肽的多种不同的酶来酶促消化靶；c）层析分离所产生的肽；d）使用质谱法测量完整肽以及其序列特异性片段的质量；e）测量的数据的基于软件的解释用于鉴定肽的序列；e）由不同蛋白酶产生的重叠肽的组合用于确定整个蛋白质的完整氨基酸序列。对于这个过程，仅需要约50 µg的蛋白质，以及商购可得的HPLC和质谱法仪器（例如来自ABSciex的TripleTOF系统或来自Thermofisher的基于Orbitrap的混合MS仪器）和合适的软件（例如来自BioinformaticsSolutions，Inc的PEAKS® Studio Software）。迄今，尚无可用于保护蛋白质例如抗体免于通过质谱法测序的机制。

然而，本领域存在保护蛋白质免于被测序的迫切需要，所述蛋白质特别是可能具有商业利益的那些蛋白质，这是因为它们可以是药物、诊断和/或生物技术产品的部分。

这个问题通过本发明人提供蛋白质特别是抗体以及产生且使用其的方法得到解决，所述蛋白质特别是抗体，包含一种或多种元素的稳定同位素的改变的比率。蛋白质中的一种或多种元素的稳定同位素的改变的比率的掺入改变所述蛋白质的质量。如果使用质谱法进行分析，则每种产生的肽的质量以及完整蛋白质的质量两者均与自然存在的那些不同。因此，使用可用的标准工具的序列确定不再是可能的。因此标记的蛋白质的进一步优点是蛋白质内的同位素的均匀分布，其导致质谱法谱中降低的信号。

发明概述

在第一个方面，本发明涉及包含抗体和标签的抗体缀合物，其中存在于抗体中的一种或多种元素显示出与所述一种或多种元素的自然存在的同位素比率不同的同位素比率，其中自然界中的稀有同位素的量增加至抗体中的相应元素原子的至少4%。在第二个方面，本发明涉及如本发明的第一个方面所详细说明的抗体缀合物用于预防抗体（特别是经由MassSpec）的测序的用途。

在第三个方面，本发明涉及稳定同位素标记用于保护如本发明的第一个方面所详细说明的抗体缀合物的序列免于（特别是经由Mass Spec）被测定的用途。

在第四个方面，本发明涉及试剂盒，其包括如本发明第一个方面所详细说明的至少一种抗体缀合物。

附图列表

图1：LC-MS/MS后的序列覆盖度；A：在正常培养基中表达的抗-TnT-抗体；B：在C13标记的培养基中表达的抗-TnT-抗体

图2：同位素效应的模拟

图3：肽NTQPIMDTDGSYFVYSK的测量谱；A：模拟；B：在正常（第一谱）或C13标记的培养基（第二谱）中表达的抗-TnT-抗体

图4：Biacore测定 – 示意图