[发明专利]用于组织保存的方法和组合物

说明书

本文描述了保存受试者的组织如脑或其部分的方法。该方法包括通过用包括水性溶液的洗涤液灌注组织来洗涤组织；通过用包括醛的固定液灌注组织来固定组织；以及通过用包括玻璃化剂的冷冻保护液灌注组织来冷冻保护组织。洗涤液、固定液和/或冷冻保护液可包括染料或造影剂以监控液体通过组织的灌注。在某些实施方式中，冷冻保护液具有约‑80℃或更高的玻璃化温度。洗涤液可进一步包括一种或多种离子通道封阻剂、钙螯合剂、血栓溶解剂、抗血小板药、呼吸毒药或突触毒药。本文还描述了分析保存的组织的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年8月28日提交的美国临时专利申请No.62/550,945的优先权权益，其全部内容通过引用纳入本文。

技术领域

本文描述的发明涉及组织，特别地脑组织保存的方法和组合物(composition)。

背景技术

固定和保存组织以维持结构的能力对于长期研究中维持临床和科学组织样本很重要。包括来自人类和非人类(如啮齿动物)来源的全脑库(whole brain banking)的神经组织，对于研究许多脑疾病如阿尔茨海默氏病(Alzheimer’disease)特别重要。参见，例如Samarasekera等，Brain banking for neurological disorders，Lancet Neurology，第12卷，第11期，第1096页-第1105页(2013)。

不幸地，自1960年代以来，脑库技术没有很大变化。人脑通常在持续16-36小时的长时间缺血性延迟后，通常通过浸泡在福尔马林中保存。不幸地，缺血性延迟(血流停滞)、福尔马林固定以及基于缓慢扩散的固定剂渗透的该组合甚至在样本被分析前导致大量的超微结构损坏和蛋白质和/或RNA的损失。

保存脑的其他方法包括用醛灌注脑并且在相对温暖的温度(如约4℃)储存固定的脑。然而，由于固定的脑保持化学活性并且能够经历化学和形态学降解，因此该技术不保证长期储存脑的超微结构的静态保存。在零下温度固定的脑的储存用作抑制化学降解，但是冰的形成会导致脑的超微结构显著脱水和机械损坏。

最近开发的被称为醛稳定化冷冻保存(ASC)的用于动物脑的保存的技术，有望大大提高保存脑的保存质量和储存时间。参见McIntyreFahy，Aldehyde-stabilizedcryopreservation(醛稳定化冷冻保存)，Cryobiology，第71卷，第448页-第458页(2015)。ASC通过灌注递送戊二醛，使得能够快速固定所有的脑结构。然后引入冷冻保护剂，使得能够在非常低的温度长期储存。ASC方法仍然有许多缺陷，包括结构质量、储存温度和质量控制。例如，用固定液灌注组织可导致肌肉或组织收缩或水肿，其限制液体灌注到毛细血管床中。另外，使用ASC方法保存可导致细胞外空间的损失、锚定的神经递质囊泡的损失、髓磷脂的释放(unraveling)、细胞骨架的重组和整体组织皱缩。

本文所涉及的所有出版物、专利和专利申请的公开内容均通过引用方式全部纳入本文。

发明内容

本文描述了保存组织(如脑)的方法以及分析保存的组织的方法。本文还描述了可以用于保存组织的洗涤液(wash fluid)、固定液和冷冻保护液。

在一个方面中，保存受试者组织的方法包括：通过用包括水性液体(如盐水(saline)或缓冲盐水)的洗涤液灌注组织来洗涤组织；通过用包括醛的固定液灌注组织来固定组织；以及通过用包括玻璃化剂的冷冻保护液灌注组织来冷冻保护组织；其中洗涤液、固定液或冷冻保护液包括染料或造影剂。

在另一个方面中，保存受试者组织的方法包括：通过用包括水性液体(如盐水或缓冲盐水)的洗涤液灌注组织来洗涤组织；通过用包括醛的固定液灌注组织来固定组织；通过用包括玻璃化剂的冷冻保护液灌注组织来冷冻保护组织，冷冻保护液具有约-80℃或更高的玻璃化温度。