[发明专利]用于检测水解酶的BRET传感器分子

权利要求书

1.一种用于检测水解酶的传感器分子，所述传感器分子具有选自以下的通式：

R¹-L-R²-B (I)，或

B-R²-L-R¹ (II)

其中

R¹是生物发光蛋白；

L是连接元素；

R²是非蛋白受体结构域；并且

B是封闭基团，

其中与B结合的R²包括可水解键，并且可水解键被水解酶水解产生生物发光共振能量转移(BRET)的改变。

2.根据权利要求1所述的传感器分子，其中所述封闭基团将所述受体结构域稳定在低荧光或非荧光状态。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的传感器分子，其中所述封闭基团包括含磷酸酯部分、含糖部分、含氨基酸部分、核苷酸、核苷、酯或醚。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的传感器分子，其中所述连接元素包括烷基链、二醇、醚、聚醚、聚酰胺、聚酯、肽、多肽、氨基酸或多核苷酸。

5.根据权利要求4所述的传感器分子，其中所述连接元素包括多肽。

6.根据权利要求5所述的传感器分子，其中R¹-L或L-R¹是单个多肽。

7.根据权利要求5或6所述的传感器分子，其中所述连接元素包括半胱氨酸残基和/或赖氨酸残基。

8.根据权利要求7所述的传感器分子，其中R²通过所述半胱氨酸残基与连接元素连接。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的传感器分子，其中R²选自Alexa Fluor染料、Bodipy染料、Cy染料、荧光素、丹磺酰基、伞形酮、荧光微球、发光微球、荧光纳米晶体、Marina蓝、Cascade蓝、Cascade黄、Pacific蓝、Oregon绿、四甲基罗丹明、罗丹明、香豆素、BODIPY、试卤灵、德克萨斯红、稀土元素螯合物，或其任何组合或衍生物。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的传感器分子，其中R¹选自荧光素酶、β-半乳糖苷酶、内酰胺酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-葡糖醛酸糖苷酶或β-葡糖苷酶。

11.根据权利要求10所述的传感器分子，其中所述荧光素酶是海肾荧光素酶、萤火虫荧光素酶、腔肠荧光素酶、北美萤火虫荧光素酶、叩头虫荧光素酶、铁路蠕虫荧光素酶、细菌荧光素酶、高斯荧光素酶、水母发光蛋白、Arachnocompa荧光素酶，或其任何一种的生物活性变体或片段，或其两种或更多种的嵌合体。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的传感器分子，其中所述水解酶是酯酶、脂肪酶、蛋白酶、磷酸酶、核酸酶、糖苷酶、DNA糖基化酶或酸酐水解酶。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的传感器分子，其中在水解酶存在和/或不存在下，R¹和R²的间距和相对取向在距离的±50％内。

14.根据权利要求13所述的传感器分子，其中R¹和R²的距离为至少4.0nm。

15.根据权利要求14所述的传感器分子，其中R¹和R²的距离在约4.0nm和约10nm之间。