[发明专利]具有细胞杀伤活性的细胞提取物成分或组合物的制备方法

说明书

本发明提供一种具有细胞杀伤活性的组合物的制造方法等。具有细胞杀伤活性的组合物的制造方法包括：将恶性肿瘤来源的细胞在培养基中培养至细胞的密度至少达到不会妨碍传代的密度；在所述培养后，将所述培养基更换为生理缓冲盐溶液；以及在所述生理缓冲盐溶液中，在从所述恶性肿瘤来源的细胞的形态学上观察到细胞死亡的时期之后，回收所述生理缓冲盐溶液。

技术领域

本发明涉及一种具有细胞杀伤活性的组合物的制造方法，以及具有细胞杀伤活性的细胞提取物成分的制备方法等。

背景技术

在培养细胞的情况下，对于许多确立的细胞株，如果在细胞增殖而覆盖培养容器表面的时期时用胰蛋白酶等分散、将细胞在新鲜的培养基中稀释、向其他培养容器转移并进行培养，则它们能够进行无限增殖。此过程称为传代，但如果不进行传代而直接继续培养，则细胞会死亡。

在专利文献1中，公开了从培养恶性肿瘤细胞后的培养基中去除肿瘤细胞而获得恶性肿瘤细胞增殖抑制剂。然而，从培养基中去除恶性肿瘤细胞而获得的剩余物是含有极为复杂的物质的组合物，认为从这样的组合物分离具有抗肿瘤活性的物质会非常困难，并且事实上是不可能的。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开昭59-33223号公报

发明内容

迄今为止以癌症治疗为目的而进行了各种治疗剂的研究与开发，但以往的抗癌剂副作用大，往往不能获得足够的效果，因此仍需寻求进一步的药剂开发。

根据本发明的一个方面，可以提供一种用于从培养的细胞制造能够用作新型抗癌剂的组合物，或者可用于获得作为新型抗癌剂而有用的物质的组合物的方法。

另外，根据本发明的一个方面，可以提供一种能够获得具有细胞杀伤活性的细胞提取物成分的方法。

本发明人等进行了深入研究，结果新发现：在细胞覆盖培养容器表面并进一步增殖为过密度(overpopulation)而出现增殖受到抑制的时期，即使更换培养基来补充充分的营养源和能源也会出现在不进行传代而继续培养细胞的情况下的细胞死亡的现象。

另外，本发明人等新发现：即使将恶性肿瘤来源的细胞在培养基中培养至细胞的密度至少达到不会妨碍传代的密度并且然后将所述培养基更换为生理缓冲盐溶液(不含营养源和/或能源)的情况下，所述细胞也产生了导致自身最终死亡的物质。这个发现表明，细胞仅以在细胞内存在的物质为材料产生具有细胞杀伤活性的物质，导致自身最终死亡。这样的发现迄今为止未在任何报告中有所提示，并且能够利用生理缓冲盐溶液获得从恶性肿瘤来源的细胞提取的具有细胞杀伤活性的成分，是完全出乎意料的。

本发明的一种实施方案涉及以下内容：

〔1〕具有细胞杀伤活性的组合物的制造方法，包括：

将恶性肿瘤来源的细胞在培养基中培养至细胞的密度至少达到不会妨碍传代的密度，

在所述培养后，将所述培养基更换为生理缓冲盐溶液，以及

在所述生理缓冲盐溶液中，在从所述恶性肿瘤来源的细胞的形态学上观察到细胞死亡的时期之后，回收所述生理缓冲盐溶液。

〔2〕根据上述〔1〕所述的制造方法，其中，所述生理缓冲盐溶液不含有葡萄糖。

〔3〕根据上述〔1〕或〔2〕所述的制造方法，其中，所述生理缓冲盐溶液选自由汉克氏平衡盐溶液、厄尔氏平衡盐溶液和磷酸盐缓冲生理盐水组成的组。

〔4〕根据上述〔1〕～〔3〕中任一项所述的制造方法，还包括：

获得含有所述回收的生理缓冲盐溶液中分子量为1kDa以下的组分的干燥物，以及

将所述干燥物溶解在介质中，从得到的溶液中去除盐类、核酸和蛋白质。