[发明专利]真皮成纤维细胞的三个亚群的分子标签和包括这些亚群之一的真皮等同物

说明书

本发明的目的是一种将真皮成纤维细胞体外鉴定为乳头状成纤维细胞、网状成纤维细胞或真皮‑皮下组织连接成纤维细胞(FJDH)的方法，包括测量选自由UCP2和FGF9，和可选的COL11A1和ACAN基因组成的组的至少一种基因的表达产物的水平，以及KLF9基因的表达产物的水平的步骤。

技术领域

本发明涉及真皮成纤维细胞的亚群的鉴定。

背景技术

皮肤由两个相关的部分组成，即表皮(epidermis)和真皮(dermis)。

表皮主要由三种细胞类型组成，即角质细胞(它们本身在表皮细胞中占大多数)、黑色素细胞和朗格汉斯细胞。这些细胞形成角质化的上皮，上皮分化成叠加的层，叠加的层之上存在死细胞形成的角质层。

真皮为表皮提供了坚实的支撑。真皮也为表皮提供营养。真皮主要由成纤维细胞和细胞外基质组成。

更确切地说，真皮包含两个不同的层：乳头状表层(300-400μm，与表皮接触)和下面的网状层(延伸至皮下组织(hypodermis))。真皮的连接小梁(conjunctive trabecula)，也可延伸至皮下组织。

乳头状真皮的特征是细胞外基质相对较薄且细胞密度高，而网状真皮具有非常致密的基质纤维网络和低的细胞密度。这两层的基质成分也不同。

此外，当培养这些不同层的成纤维细胞(分别称为乳头状成纤维细胞和网状成纤维细胞)时，它们具有不同的形态特征。例如，网状成纤维细胞具有延伸且更方的外观，而乳头状成纤维细胞通常具有薄的梭形形态。此外，在这两个细胞亚群之间观察到增殖、培养基质产生、对生长因子的反应和生长因子的产生的差异。

因此，在正常皮肤中，真皮由至少两种成纤维细胞亚群组成，这必然对皮肤本身产生重要影响。

在皮肤等同物(或体外重建的皮肤)领域，尽可能精确地再现正常皮肤的不同成分的特征和性质是至关重要的，以便尽可能忠实地反映正常皮肤的反应。

已经观察到真皮成纤维细胞的亚群之间的性质差异，体外皮肤等同物包括使用生物标记物明确鉴定的真皮成纤维细胞亚群是重要的。

发明内容

本发明满足这些需求。

Janson et al.(2012)Journal of Investigative Dermatology 132:2565-2572进行了一项转录组研究，以鉴定乳头状表型和网状表型的分子特征。他们发现MGP蛋白只在网状真皮中表达，而PDPN和NTN1基因在乳头状成纤维细胞中表达较高。

Nauroy et al.(2017)Journal of Investigative Dermatology从仅年轻供体的皮肤样品中鉴定出一些在网状成纤维细胞中的差异表达标志物，这些标志物在乳头状成纤维细胞中不存在。例如，COL11A1、MGP、FGF18、COMP和ACAN基因已被鉴定为在网状成纤维细胞中过表达。

然而，这些文章只考虑了乳头状成纤维细胞和网状成纤维细胞。然而，本发明人已经证明，成纤维细胞的另一个亚群，称为真皮-皮下连接成纤维细胞(dermal-hypodermaljunction fibroblast)，可以在由真皮发散到皮下组织的连接小梁处分离。

发明人还鉴定了涉及少量生物标志物的分子标签，从而可以鉴定和区分真皮成纤维细胞的三个亚群：乳头状成纤维细胞、网状成纤维细胞和真皮-皮下组织连接成纤维细胞。

除了首次分离真皮-皮下组织连接成纤维细胞亚群之外，本发明人已经确实地证明了乳头状、网状和真皮-皮下组织连接成纤维细胞可以通过测量选自UCP2和FGF9基因和可选的COL11A1和ACAN基因的至少一种基因的表达水平，以及可选的KLF9基因的表达水平来鉴定。