[发明专利]唾液酸转移酶及其在生产唾液酸化低聚糖中的用途

权利要求书

1.一种用于生产唾液酸化低聚糖的方法，该方法包括以下步骤：

a)提供至少一种遗传工程化的细胞，其包含一种异源的唾液酸转移酶，所述异源的唾液酸转移酶能够具有α-2,3-唾液酸转移酶活性和/或α-2,6-唾液酸转移酶活性，用于将唾液酸残基从作为供体底物的其核苷酸激活的形式转移到受体分子中，其中所述受体分子选自乳糖、乳-N-三糖II和人乳低聚糖；

b)在发酵液中并在允许生产所述唾液酸化低聚糖的条件下培育所述至少一种细胞；以及任选地

c)回收所述唾液酸化低聚糖。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述唾液酸化低聚糖选自3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖、LST-a、LST-b、LST-c和DSLNT。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述发酵液中包含至少一种碳源，所述至少一种碳源优选地选自葡萄糖、果糖、蔗糖、甘油及其组合。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述发酵液中包含选自N-乙酰葡糖胺、半乳糖和唾液酸中的至少一种。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述至少一种细胞是在不存在和/或不添加选自N-乙酰葡糖胺、半乳糖和唾液酸中的一种或多种的情况下培养的。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述至少一种细胞是在存在选自乳糖、乳-N-三糖II、LNT和LNnt中的至少一种的情况下培养的。

7.一种用于产生唾液酸化低聚糖的遗传工程化的细胞，其中所述遗传工程化的细胞包含异源的唾液酸转移酶，所述异源的唾液酸转移酶能够具有α-2,3-唾液酸转移酶活性和/或α-2,6-唾液酸转移酶活性，用于将唾液酸残基从作为供体底物的其核苷酸激活的形式转移到受体分子中，其中所述受体分子选自乳糖、乳-N-三糖II和人乳低聚糖。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法或根据权利要求7所述的遗传工程化的细胞，其中所述受体分子为人乳低聚糖，其选自三糖、四糖和五糖，优选地选自3-岩藻糖基乳糖、乳-N-四糖、乳-N-新四糖、唾液酸乳-N-四糖a、唾液酸乳-N-四糖b、乳-N-岩藻戊糖I和乳-N-岩藻戊糖II。

9.根据权利要求1至6或8中任一项所述的方法，或根据权利要求7或8所述的遗传工程化的细胞，其中所述异源的唾液酸转移酶选自：

i.包含SEQ ID NO:1至33中任一项所代表的氨基酸序列或由其组成的多肽；

ii.包含与SEQ ID NO:1至33中任一项所代表的任一种氨基酸序列具有至少80％的序列相似性的氨基酸序列或由其组成的多肽；和

iii.i和ii中任一种多肽的片段。

10.根据权利要求1至6或8至9中任一项所述的方法，或根据权利要求7至9中任一项所述的遗传工程化的细胞，其中所述的遗传工程化的细胞包含含有编码异源的唾液酸转移酶的核苷酸序列的核酸分子，所述核苷酸序列选自：

i.编码SEQ ID NO:1至33中任一项所代表的多肽的核苷酸序列；

ii.SEQ ID NO:34至66中任一项所代表的核苷酸序列；

iii.与编码SEQ ID NO:1至33中任一项所代表的多肽的一种核苷酸序列具有至少80％的序列相似性的核苷酸序列；

iv.与SEQ ID NO:34至66中所代表的任一种核苷酸序列具有至少80％的序列相似性的核苷酸序列；

v.与i、ii、iii和iv中任一种核苷酸序列互补的核苷酸序列；和

vi.i、ii、iii、iv和v中任一种核苷酸序列的片段，其中所述核苷酸序列可操作地连接到至少一种核酸表达控制序列，所述核酸表达控制序列影响在遗传工程化的细胞中所述编码异源的唾液酸转移酶的核苷酸序列的转录和/或翻译。