[发明专利]M35家族的内切蛋白酶和S53家族的外切蛋白酶在淀粉发酵中的组合使用

权利要求书

1.一种用于从含淀粉材料产生发酵产物的方法，该方法包括：

a)使用糖源生成酶在低于所述含淀粉材料的初始糊化温度的温度下使该含淀粉材料糖化；以及

b)使用发酵生物进行发酵；其中

步骤a)和/或b)在内切蛋白酶和外切蛋白酶混合物的存在下进行，其中该外切蛋白酶以总蛋白酶酶蛋白为基础构成该蛋白酶混合物的至少5％(w/w)，并且其中该内切蛋白酶选自M35家族内切蛋白酶以及该外切蛋白酶选自S53家族外切蛋白酶。

2.一种用于从含淀粉材料产生发酵产物的方法，该方法包括以下步骤：

(a)在高于所述含淀粉材料的初始糊化温度的温度下，在α-淀粉酶的存在下，液化含淀粉材料；

(b)使用糖源生成酶来使步骤(a)中获得的液化材料糖化；

(c)使用发酵生物进行发酵；

其中步骤b)和/或c)在内切蛋白酶和外切蛋白酶混合物的存在下进行，其中该外切蛋白酶以总蛋白酶酶蛋白为基础构成该蛋白酶混合物的至少5％(w/w)，并且其中该内切蛋白酶选自M35家族内切蛋白酶以及该外切蛋白酶选自S53家族外切蛋白酶。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中糖化和发酵同时进行。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该外切蛋白酶以总蛋白酶酶蛋白为基础构成该蛋白酶混合物的至少10％(w/w)，例如至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、特别地至少75％，更特别地该外切蛋白酶以总蛋白酶酶蛋白为基础构成组合物中该蛋白酶混合物的从5％至95％(w/w)、特别地10％至80％(w/w)、特别地15％至70％(w/w)、更特别地20％至60％(w/w)、以及甚至更特别地以总蛋白酶酶蛋白为基础构成组合物中蛋白酶混合物的25％至50％(w/w)。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该内切蛋白酶和外切蛋白酶以5:2微克酶蛋白(EP)/g干固体(DS)，特别地是5:3，更特别地是5:4的比例存在。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中该内切蛋白酶选自M35家族，更具体地源自橙色嗜热子囊菌的M35蛋白酶，包含SEQ ID NO:1的氨基酸1-177的其成熟多肽或与SEQID NO:1的多肽具有至少75％同一性，优选地至少80％、更优选地至少85％、更优选地至少90％、更优选地至少91％、更优选地至少92％、甚至更优选地至少93％、最优选地至少94％、并且甚至最优选地至少95％，例如甚至至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的多肽。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中该S53外切蛋白酶源自曲霉属、木霉属、嗜热子囊菌属或嗜热真菌属的菌株，特别是米曲霉、黑曲霉、里氏木霉、嗜热嗜热子囊菌或疏棉状嗜热丝孢菌。

8.根据权利要求7所述的方法，其中该S53外切蛋白酶选自与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的丝氨酸蛋白酶；或选自与SEQ IDNO:4的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的丝氨酸蛋白酶。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中α-淀粉酶是在糖化和/或发酵期间存在或添加。

10.根据权利要求9所述的方法，其中该α-淀粉酶是酸性α-淀粉酶，优选地是酸性真菌α-淀粉酶。