[发明专利]甲基化DNA分离和/或检测用色谱用填充剂

说明书

本发明提供一种能够高精度地检测甲基化DNA的色谱用填充剂。一种甲基化DNA分离和/或检测用离子交换色谱用填充剂，含有在表面具有阳离子性官能团的疏水性交联共聚物粒子构成的基材粒子，该疏水性交联共聚物包含二乙烯基芳香族单体。

技术领域

本发明涉及用于甲基化DNA的分离和/或检测的色谱用填充剂。

背景技术

DNA甲基化是最常见的与癌变相关的表观遗传变化之一。作为癌细胞中的特征性表观遗传异常，已知有CpG岛的异常DNA甲基化。CpG岛是介由磷酸二酯键(p)连接的胞嘧啶(C)－鸟嘌呤(G)的2碱基序列高频出现的区域，大多存在于基因上游的启动子区域。CpG岛的异常DNA甲基化通过抑癌基因的失活等而参与癌变。

作为甲基化DNA的解析方法，已经确立了利用亚硫酸氢盐(bisulfite)法的方法。将单链DNA用亚硫酸氢盐处理时，胞嘧啶转化为尿嘧啶，但甲基化的胞嘧啶仍然为胞嘧啶。因此，对经亚硫酸氢盐处理后的DNA进行PCR时，甲基化胞嘧啶直接扩增为胞嘧啶，但非甲基化胞嘧啶由尿嘧啶置换为胸腺嘧啶而被扩增，因此由于DNA的甲基化而使PCR扩增产物的序列产生差异。以往的甲基化DNA的解析方法中，一般利用电泳、测序来检测该PCR扩增产物的序列的差异。然而，这些方法的缺点是电泳、测序耗费工夫和时间。

在生物化学、医学等领域中，作为能够简便且高精度地分离和检测核酸、蛋白质、多糖类等生物体高分子的方法，广泛使用离子交换色谱。对核酸进行离子交换色谱分离时，一般使用利用核酸分子中的磷酸的负电荷来分离核酸的阴离子交换色谱。作为在阴离子交换色谱的柱填充剂中使用的阳离子性官能团，有二乙氨基乙基等弱阳离子性基团、季铵基等强阳离子性基团。此外，专利文献1中公开了能够通过使用具有强阳离子性基团和弱阳离子性基团这两者作为官能团的柱填充剂的离子交换色谱来检测20mer的寡核苷间的一个碱基的差异。

专利文献2中公开了如下方法：通过将样品DNA用亚硫酸氢盐处理后进行PCR扩增，对扩增产物进行使用具有强阳离子性基团和弱阳离子性基团这两者作为官能团的柱填充剂的离子交换色谱，从而检测样品DNA的甲基化。这是与以往的使用电泳、测序的方法相比能够实现简便且短时间内的甲基化DNA的解析的优异的方法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开公报第2012/108516号

专利文献2：国际公开公报第2014/136930号

发明内容

使用专利文献2这样的离子交换色谱的甲基化DNA的检测方法中，为了提高检测精度，要求使色谱法中的甲基化DNA的峰与非甲基化DNA的峰的分离度更大。本发明提供一种能够高精度地分离和/或检测甲基化DNA的色谱用填充剂。

本发明提供以下方案。

〔1〕一种甲基化DNA分离和/或检测用离子交换色谱用填充剂，含有在表面具有阳离子性官能团的疏水性交联共聚物粒子构成的基材粒子，该疏水性交联共聚物包含二乙烯基芳香族单体。

〔2〕根据〔1〕所述的离子交换色谱用填充剂，其中，上述二乙烯基芳香族单体选自二乙烯基苯、二乙烯基萘、二乙烯基蒽、二乙烯基甲苯、二乙烯基二甲苯和二乙烯基联苯。

〔3〕根据〔1〕或〔2〕所述的离子交换色谱用填充剂，其中，上述疏水性交联共聚物在总质量中含有3～15质量％的上述二乙烯基芳香族单体。

〔4〕根据〔1〕～〔3〕中任一项所述的离子交换色谱用填充剂，其中，上述疏水性交联共聚物包含上述二乙烯基芳香族单体、具有2个以上乙烯基的非芳香族疏水性交联性单体和具有反应性官能团的单体。

〔5〕根据〔4〕所述的离子交换色谱用填充剂，其中，上述反应性官能团为缩水甘油基或异氰酸酯基。