[发明专利]用于高效生成瑞鲍迪苷的豌豆贝壳杉烯氧化酶

权利要求书

1.能够生成一种或多种甜菊糖苷的经遗传修饰的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)宿主细胞，其包含编码贝壳杉烯(kaurene)氧化酶的异源核酸，所述贝壳杉烯氧化酶包含与SEQ ID NO：1具有至少80％、85％、90％、或95％序列同一性的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其能够以大于30％、35％、40％、45％、50％、或55％的效率将贝壳杉烯转化为异贝壳杉烯酸(kaurenoic acid)。

3.根据前述权利要求任一项所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其中，所述贝壳杉烯氧化酶包含具有SEQ ID NO：1的所述序列的氨基酸序列。

4.根据前述权利要求任一项所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其中，所述贝壳杉烯氧化酶能够氧化贝壳杉烯、贝壳杉烯醇(kaurenol)和/或贝壳杉烯醛(kaurenal)的C19位。

5.根据前述权利要求任一项所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其中，所述贝壳杉烯氧化酶由异源核酸编码，其中所述异源核酸包含与SEQ ID NO：15具有至少80％、85％、90％、或95％序列同一性的核苷酸序列。

6.根据前述权利要求任一项所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其中，所述贝壳杉烯氧化酶由具有SEQ ID NO：15的所述序列的异源核酸编码。

7.根据前述权利要求任一项所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其能够以大于30％、35％、40％、45％、50％、或55％的效率将贝壳杉烯转化为异贝壳杉烯酸，和其中所述贝壳杉烯氧化酶包含与SEQ ID NO：1具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。

8.根据前述权利要求任一项所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其中，所述贝壳杉烯氧化酶是多肽，所述多肽具有与SEQ ID NO：1的功能结构域具有至少80％、85％、90％、或95％序列同一性的功能结构域。

9.根据前述权利要求26所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其能够以大于55％的效率将贝壳杉烯转化为异贝壳杉烯酸。

10.根据前述权利要求任一项所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其能够生成异贝壳杉烯酸。

11.根据前述权利要求任一项所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其能够生成甜菊醇(steviol)。

12.根据前述权利要求任一项所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其能够生成RebD。

13.根据前述权利要求任一项所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其能够生成RebM。

14.根据前述权利要求任一项所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其能够以至少10：1、100：1、或1000：1的比例生成RebM和RebM2。

15.根据前述权利要求任一项所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其中，所述经遗传修饰的宿主细胞生成不可检测水平的RebM2。

16.根据前述权利要求任一项所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其中，所述经遗传修饰的宿主细胞还包含一种或多种异源核酸，所述一种或多种异源核酸编码制备甜菊醇的途径的一种或多种酶。

17.根据前述权利要求任一项所述的经遗传修饰的酿酒酵母宿主细胞，其中，所述经遗传修饰的宿主细胞还包含一种或多种异源核酸，所述一种或多种异源核酸编码制备甜菊糖苷的途径的一种或多种酶。