[发明专利]合成鹅膏蕈碱的新方法

说明书

本发明涉及用于合成具有连接至中心色氨酸基团的6’位的氨基的鹅膏蕈碱衍生物的新方法。本发明还涉及具有连接至中心色氨酸基团的6’位的氨基的新鹅膏蕈碱衍生物、这样的鹅膏蕈碱衍生物的新缀合物以及包含这样的缀合物的药物组合物。

发明领域

本发明涉及用于合成具有连接至中心色氨酸基团的6’位的氨基的鹅膏蕈碱衍生物的新方法。本发明还涉及具有连接至中心色氨酸基团的6’位的氨基的新鹅膏蕈碱衍生物、这样的鹅膏蕈碱衍生物的新缀合物以及包含这样的缀合物的药物组合物。

发明背景

鹅膏毒素是由8个氨基酸组成的环肽，发现于鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)蕈菌中(参见图1)。鹅膏毒素特异性抑制哺乳动物细胞的DNA-依赖性RNA聚合酶II，并且由此还抑制受影响细胞的转录和蛋白质生物合成。细胞内转录的抑制导致生长和增殖的停止。尽管不是共价结合，但是鹅膏蕈碱与RNA聚合酶II之间的络合是非常紧密的(K_D＝3nM)。将鹅膏蕈碱从酶上解离是一个非常缓慢的过程，因而使得受影响的细胞不大可能恢复。当转录抑制持续太久时，细胞会经历程序性细胞死亡(细胞凋亡)。

已经在1981年通过使用与色氨酸(Trp)(氨基酸4；参见图1)的吲哚环连接的连接基经由重氮化将抗Thy 1.2抗体与α-鹅膏蕈碱偶联而开发了鹅膏毒素作为细胞毒性部分用于肿瘤治疗的用途(DavisPreston,Science 213(1981)1385-1388)。DavisPreston确定了连接的位置为7’位。MorrisVenton同样证明了7’位取代产生了衍生物，其保持了细胞毒活性(MorrisVenton,Int.J.Peptide Protein Res.21(1983)419-430)。

专利申请EP 1859811A1(2007年11月28日公开)记载了缀合物，其中β-鹅膏蕈碱的鹅膏毒素氨基酸1的γC原子直接(即无连接基结构)与白蛋白或者单克隆抗体HEA125、OKT3或PA-1偶联。此外，这些缀合物显示了对乳腺癌细胞(MCF-7)、伯基特淋巴瘤细胞(Raji)和T淋巴瘤细胞(Jurkat)的增殖具有抑制作用。虽然提议使用连接基，包括包含例如酰胺、酯、醚、硫醚、二硫化物、脲、硫脲、烃基团等元件的连接基，但是实际上并没有给出这样的结构，且没有提供更多的细节，例如在鹅膏毒素上的连接位点。

专利申请WO 2010/115629和WO 2010/115630(均于2010年10月14日公开)记载了缀合物，其中抗体，例如抗EpCAM抗体(如人源化抗体huHEA125)，通过(i)鹅膏毒素氨基酸1的γC原子，(ii)鹅膏毒素氨基酸4的6’C原子或(iii)鹅膏毒素氨基酸3的δC原子与鹅膏毒素偶联，每种情况下直接偶联或通过抗体与鹅膏毒素之间的连接基偶联。所提议的连接基包含例如酰胺、酯、醚、硫醚、二硫化物、脲、硫脲、烃基团等的元件。另外，这些缀合物显示了对乳腺癌细胞(MCF-7细胞系)、胰腺癌(Capan-1细胞系)、结肠癌(Colo205细胞系)和胆管癌(OZ细胞系)的增殖具有抑制作用。

专利申请WO 2012/119787记载了靶结合基团可以通过连接基在色氨酸氨基酸4上的另外的连接位点(即1’-N)连接至鹅膏毒素，而不影响这样的鹅膏毒素与其靶点(哺乳动物细胞的DNA依赖性RNA聚合酶II)的相互作用。

专利申请WO 2014/009025记载了鹅膏蕈碱衍生物的全合成，其使用了γ,δ-二羟基异亮氨酸的新合成子作为原料之一。此外，专利申请PCT/EP2016/078984[公开为WO2017/089607]记载了γ-和ε-鹅膏蕈碱的衍生物的全合成，其使用容易获得的(2S,3R,4S)-L-4-羟基异亮氨酸作为原料之一。然而，这些方法以及目前尝试的所有其他全合成方法或部分合成方法均通过使用Savige-Fontana的方法将中心色氨酸基团掺入鹅膏毒素核心。在该方法中，将顺式-2-羧基-3a-羟基-1,2,3,3a,8,8a-六氢吡咯并[2,3-b]吲哚(“Hpi”)掺入线性鹅膏蕈碱前体结构。在酸催化的Hpi-半胱氨酸偶联反应中，形成具有中心色氨酸基团的鹅膏蕈碱环系。