[发明专利]在需氧条件下用于厌氧细菌的多价培养基

说明书

本发明涉及在血液培养瓶中在需氧条件下用于厌氧细菌的多价培养基。本发明提供了一种用于在需氧气氛中培养厌氧细菌或需氧细菌的多价培养基，其包含用于细菌的基础培养基，其特征在于，其还包含以下抗氧化剂化合物的混合物：氢硫化钠(Na₂S)、L‑半胱氨酸、抗坏血酸、谷胱甘肽、过氧化氢酶、泛醇和硫辛酸。

技术领域

本发明涉及在血液培养瓶中在需氧条件下用于厌氧细菌的多价培养基。

背景技术

厌氧细菌是对氧气敏感的细菌。有为了生长绝对不与氧气接触的严格厌氧细菌(对氧气极度敏感)、和耐氧的厌氧细菌，其可以暴露于低浓度的氧气而不抑制其生长。对氧气的敏感性与这些细菌缺乏酶系统的事实相关。该酶系统通常可以使活性氧解毒；缺乏这种解毒导致氧气对这些细菌的毒性作用。为了使这些严格的厌氧或耐氧的厌氧细菌得以生长，已实施了“无氧”培养方法[1]。

缩短细菌血症诊断时间仍然是微生物学家的主要挑战。诊断的可靠性和速度是改善患者管理的关键要素。在这方面，尽管许多分子系统已经商业化，但迄今为止，在液体培养基中的培养仍然是流体临床样本或身体分泌物(例如粪便、痰、阴道分泌物样本或血液样本)诊断细菌血症的最佳标准。其基于在自动培养系统中分别针对厌氧和需氧细菌孵育含有样本的两个瓶子来检测细菌的生长。

目前，医院对厌氧细菌的诊断最普遍地是在含有厌氧气氛的液体培养瓶中进行，所述厌氧气氛即是一种不含氧的气氛，其中使用脱气方法将大气中的氧气替换为氮气。厌氧和需氧细菌在不同的培养瓶中生长，即将厌氧和需氧两个瓶在自动培养系统中孵育，以检测细菌的生长。

为了将用于诊断细菌血症或为了研究目的而培养细菌的瓶子数量最小化，发明人试图提供一种液体培养基，其将允许需氧细菌和厌氧细菌都在需氧气氛中生长。

最近有报道表明，使用补充了抗氧化剂化合物的基础培养基，严格厌氧细菌物种在需氧气氛中显示出生长[2]。

在WO2014/064359和WO2015/162377中，描述了富含抗氧化剂(即尿酸、抗坏血酸、谷胱甘肽和氢硫化钠)的培养基，以改善和促进以下细菌在无细胞培养中的生长条件：严格厌氧细菌或其生长对氧气压力敏感的细菌，尤其是对高氧气压力耐受性差的细菌，以及所述细菌的最佳生长需要比空气中氧气含量相对更低氧气含量的孵育气氛。在WO 2015/162377中描述的最佳结果涉及补充有包含尿酸的抗氧化剂混合物的培养基。

在测试了WO2014/064359和WO2015/162377中描述的补充有抗氧化剂化合物的液体形式的用于血液培养的培养基之后，发明人注意到某些厌氧细菌，包括一些在医院实践中最常见的细菌，不能需氧生长，即脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)、诺氏拟杆菌(Bacteroides nordii)、多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)、拜氏梭状芽胞杆菌(Clostridium beijeirinckii)、丁酸梭菌(Clostridium butyricum)、马氏梭状芽胞杆菌(Clostridium massilioamazoniensis)、不规则梭状芽胞杆菌(Clostridiumirregulare)、大芬戈尔德菌(Finegoldia magna)、痤疮丙酸杆菌(Propionibacteriumacnes)和狂热丙酸杆菌(Propionibacterium avidum)。

根据上述抗氧化剂化合物的混合物，最好的混合物似乎是氢硫化钠(Na₂S)、L-半胱氨酸、抗坏血酸、尿酸和谷胱甘肽的组合。但是，补充有该抗氧化剂化合物混合物用于厌氧细菌的培养基无法使上述难以生长的厌氧细菌生长。

发明内容

另外，根据本发明，发明人寻求一种新的多价液体培养基，其用于在不存在尿酸的情况下在需氧气氛中培养需氧和厌氧细菌，因为尿酸具有降低的稀释特性，导致在水性溶液中的溶解速率不能在样品之间定量重复。