[发明专利]经修饰的Cas9蛋白及其用途

权利要求书

1. 蛋白，该蛋白由包含在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中1335位的精氨酸被选自丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苏氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸的1个氨基酸取代而得到的氨基酸序列的序列构成，并且具有与向导RNA的结合能力。

2. 权利要求1所述的蛋白，其中，在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中，进一步在1219位具有突变。

3. 权利要求1或2所述的蛋白，其中，在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中，进一步在1322位具有突变。

4. 蛋白，该蛋白由包含在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中1335位的精氨酸被选自丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苏氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸的1个氨基酸取代、并进一步在1219位具有突变的氨基酸序列的序列构成，并且具有与向导RNA的结合能力。

5. 蛋白，该蛋白由包含在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中1335位的精氨酸被选自丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苏氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸的1个氨基酸取代、并进一步在1322位具有突变的氨基酸序列的序列构成，并且具有与向导RNA的结合能力。

6.权利要求1～5中任一项所述的蛋白，其中，1335位的精氨酸的取代是取代成丙氨酸。

7.权利要求1～5中任一项所述的蛋白，其中，1335位的精氨酸的取代是取代成异亮氨酸、蛋氨酸、苏氨酸或缬氨酸。

8.权利要求2或4所述的蛋白，其中，1219位的突变是谷氨酸被取代成苯丙氨酸。

9.权利要求3或5所述的蛋白，其中，1322位的突变是丙氨酸被取代成精氨酸、组氨酸或赖氨酸。

10.权利要求9所述的蛋白，其中，1322位的突变是丙氨酸被取代成精氨酸。

11. 权利要求1～10中任一项所述的蛋白，其中，在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中，进一步在选自1111位、1135位、1218位和1337位的至少一个位置具有突变。

12. 权利要求11所述的蛋白，其中，在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中，进一步在选自1111位、1135位、1218位和1337位的至少2个位置具有突变。

13. 权利要求11所述的蛋白，其中，在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中，进一步在选自1111位、1135位、1218位和1337位的至少3个位置具有突变。

14. 权利要求11所述的蛋白，其中，在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中，进一步在1111位、1135位、1218位和1337位具有突变。

15.权利要求11～14中任一项所述的蛋白，其中，

1111位的突变是亮氨酸被取代成精氨酸、组氨酸或赖氨酸；

1135位的突变是天冬氨酸被取代成缬氨酸；

1218位的突变是甘氨酸被取代成精氨酸、组氨酸或赖氨酸；

1337位的突变是苏氨酸被取代成精氨酸、组氨酸或赖氨酸。

16. 权利要求1～15中任一项所述的蛋白，其中，在SEQ ID NO: 1的施行了突变的位置以外的位点具有80%以上的同源性。