[发明专利]岩藻糖基转移酶及其在生产岩藻糖基化低聚糖中的用途

权利要求书

1.一种用于生产岩藻糖基化低聚糖的方法，所述方法包括以下步骤:

a)提供至少一种已被遗传工程化以表达异源的岩藻糖基转移酶的遗传工程化的细胞，其中所述异源的岩藻糖基转移酶能够将岩藻糖残基从供体底物转移到受体分子，所述受体分子是乳四糖；

b)在存在至少一种碳源的情况下并且在适合于所述至少一种遗传工程化的细胞的条件下，培养所述至少一种遗传工程化的细胞，以将岩藻糖残基从供体底物转移到受体分；和

c)任选地回收所述岩藻糖基化低聚糖。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述受体分子选自LNT和LNnT。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述异源的岩藻糖基转移酶选自SEQ ID NO:16至30中任一项所表示的多肽、SEQ ID NO:16至30中任一项所表示的多肽的功能性变体、SEQID NO:16至30中的任一项所表示的多肽的功能性片段以及SEQ ID NO:16至30中任一项所表示的多肽的功能性片段的功能性变体。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述异源的岩藻糖基转移酶是由核酸分子编码，所述核酸分子包括:

i)SEQ ID NO:1至15中任一项所表示的核苷酸序列；

ii)与SEQ ID NO:1至15中任一项所表示的任一种核苷酸序列具有至少80％的序列同一性的核苷酸序列，优选地在该序列的整个长度具有序列同一性；

iii)编码具有SEQ ID NO:16至30中任一项所表示的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列；

iv)编码具有与SEQ ID NO:16至30中任一项所表示的任一种氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列；

v)编码iii)和iv)中任一种多肽的功能性片段的核苷酸序列；或

vi)其中在严格的条件下，所述核酸分子与i)、ii)、iii)、iv)或v)中核酸分子的互补链杂交。

5.一种用于生产岩藻糖基化低聚糖/用于根据权利要求1的方法的遗传工程化的细胞，其中所述细胞已被遗传工程化以表达异源的岩藻糖基转移酶，其中所述异源的岩藻糖基转移酶能够将岩藻糖残基从供体底物转移到受体分子，所述受体分子是乳四糖。

6.根据权利要求5所述的遗传工程化的细胞，其中所述异源的岩藻糖基转移酶选自SEQID NO:16至30中任一项所表示的多肽、SEQ ID NO:16至30中任一项所表示的多肽的功能性变体、SEQ ID NO:16至30中任一项所表示的多肽的功能性片段和SEQ ID NO:16至30中任一项所表示的多肽的功能性片段的功能性变体。

7.根据权利要求6或7所述的遗传工程化的细胞，其中所述异源的岩藻糖基转移酶是由核酸分子编码，所述核酸分子包括:

i)SEQ ID NO:1至15中任一项所表示的核苷酸序列；

ii)与SEQ ID NO:1至15中任一项所表示的任一种核苷酸序列具有至少80％的序列同一性的核苷酸序列，优选地在该序列的整个长度具有序列同一性；

iii)编码具有SEQ ID NO:16至30中任一项所表示的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列；

iv)编码具有与SEQ ID NO:16至30中任一项所表示的任一种氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列；

v)编码iii)和iv)中任一种多肽的功能性片段的核苷酸序列；或

vi)其中在严格的条件下，所述核酸分子与i)、ii)、iii)、iv)或v)中核酸分子的互补链杂交。

8.根据权利要求6至7中任一项所述的遗传工程化的细胞，其中与遗传工程化前的细胞相比，所述细胞已被遗传工程化以包含增加的胞内GDP-岩藻糖的生产能力，优选地所述细胞已被遗传工程化以i)表达编码双功能岩藻糖激酶/L-岩藻糖-1-磷酸-鸟苷转移酶的基因，所述酶催化由L-岩藻糖形成GDP-岩藻糖；或ii)过表达编码磷酸甘露糖变位酶、甘露糖-1-磷酸鸟苷酰转移酶、GDP-甘露糖-4,6-脱水酶和GDP-L-岩藻糖合酶的基因中的至少一种。