[发明专利]生长因子受体的组成型活性变体作为选择标记物在生成稳定生产细胞系中的用途

权利要求书

1.选择表达一种或多种目的蛋白(POI)的稳定生产细胞系的方法，其包括以下步骤：

(a)提供细胞系，

(b)同时稳定转染所述细胞系，所述细胞系具有：

(i)编码生长因子受体的组成型活性变体的基因，其中在不表达所述生长因子受体的组成型活性变体的情况下，所述细胞系的生长取决于由所述生长因子受体识别的生长因子，以及

(ii)编码所述POI的一种或多种目的基因(GOI)，以及

(c)在细胞培养基中培养所述细胞系，所述细胞培养基或者不包含由所述生长因子受体识别的生长因子，或者在不表达所述生长因子受体的组成型活性变体的情况下包含浓度低至无法支持细胞生长的所述生长因子。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞系选自CHO细胞、HEK293细胞、CAP细胞、Per.C6细胞、BHK细胞、Vero细胞、MDCK细胞、杂交瘤细胞和成纤维细胞。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述POI选自细胞外基质蛋白、生长因子、肽激素、细胞因子、酶、抗体、抗体片段、凝血因子、蛋白酶抑制剂和病毒蛋白产物。

4.如权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中所述POI选自人重组α-1-抗胰蛋白酶(rhAAT)，纤维蛋白原，层粘连蛋白(LAM)，干扰素(IFN)，白细胞介素(IL)，免疫球蛋白G(IgG)，免疫球蛋白M(IgM)，双特异性单克隆抗体(BsAb)，促红细胞生成素(EPO)，凝血因子VII(FVII)，凝血因子VIII(FVIII)，凝血因子IX(FIX)，von-Willebrand因子(vWF)，C1酯酶抑制剂(C1-抑制剂；C1 Inh)，来自HIV-1、HIV-2、EIAV、SIV或其他逆转录病毒科(gag-pol)的gag-pol，来自腺相关病毒的rep蛋白(REP)，来自腺相关病毒的cap蛋白(CAP)及其变体。

5.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其中所述编码生长因子受体的组成型活性变体的基因和所述GOI存在于同一载体上。

6.如权利要求1至5中任一权利要求所述的方法，其中所述生长因子受体和相应的生长因子是IGF-1R(胰岛素样生长因子1受体)，IR(胰岛素受体)和IGF-1、IGF-2和/或胰岛素；EGFR(表皮生长因子受体)和相应的EGFR配体；FGFR(成纤维细胞生长因子受体)和FGF；或PDGFR(血小板衍生生长因子受体)和PDGF。

7.如权利要求1至6中任一权利要求所述的方法，其中所述生长因子受体的组成型活性变体是人CD8-IGF-1R融合蛋白。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述人CD8-IGF-1R融合蛋白包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成。

9.如权利要求7或8所述的方法，其中所述人CD8-IGF-1R融合蛋白由包含SEQ ID NO:2的核苷酸序列的核酸编码或由SEQ ID NO:2的核苷酸序列组成的核酸编码。

10.如权利要求1至9中任一权利要求所述的方法，其中在允许选择发生的持续时间内执行步骤(c)。

11.在稳定生产细胞系中表达一种或多种目的蛋白(POI)的方法，其包括以下步骤：

(a)执行权利要求1至10中任一权利要求所述的方法，

(b)在所述稳定生产细胞系中表达所述POI，以及

(c)从所述细胞或细胞培养基中收集所述POI。

12.生长因子受体的组成型活性变体作为选择标记物在细胞培养中的用途。

13.如权利要求12所述的用途，其中所述细胞是如权利要求2中所定义的细胞系。