[发明专利]用于增强低聚糖利用的工程化的微生物

权利要求书

1.一种微生物，其包含一种或多种选自以下的基因修饰：

i)与亲代微生物中的PMA1活性相比提高所述微生物中的PMA1活性的基因修饰，

ii)与亲代微生物中的SNF3活性相比降低所述微生物中的SNF3活性的基因修饰，

iii)与亲代微生物中的RGT2活性相比降低所述微生物中的RGT2活性的基因修饰，以及

iv)与亲代微生物中的GPR1活性相比降低所述微生物中的GPR1活性的基因修饰。

2.如权利要求1所述的微生物，其中：

i)提高所述PMA1活性的所述基因修饰是对质膜ATP酶基因(pma1)的基因修饰，

ii)降低所述SNF3活性的所述基因修饰是对蔗糖非发酵基因(snf3)的基因修饰，

iii)降低所述RGT2活性的所述基因修饰是对恢复型葡萄糖转运基因(rgt2)的基因修饰，并且

iv)降低所述GPR1活性的所述基因修饰是对G蛋白偶联受体1基因(gpr1)的基因修饰。

3.如权利要求1或2所述的微生物，其中：

i)PMA1具有序列SEQ ID NO:1或与SEQ ID NO:1具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性，

ii)SNF3具有序列SEQ ID NO:2或与SEQ ID NO:2具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性，

iii)RGT2具有序列SEQ ID NO:3或与SEQ ID NO:3具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性，

iv)GPR1具有序列SEQ ID NO:4或与SEQ ID NO:4具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性。

4.如前述权利要求中任一项所述的微生物，其中与亲代微生物中的PMA1活性相比提高所述微生物中的PMA1活性的pma1中的所述基因修饰是以下的一种或多种：a)用可操作地连接至所述内源性pma1的外源性启动子取代内源性启动子；b)经由染色体外遗传物质表达pma1；c)将pma1的一个或多个拷贝整合到所述微生物的基因组中；d)对所述内源性pma1的修饰以产生修饰的pma1，所述修饰的pma1编码组成型活性PMA1或与未修饰的PMA1相比具有提高的活性的PMA1，e)将包含pma1的染色体外遗传物质引入到所述微生物中，所述pma1编码组成型活性PMA1或与相应野生型PMA1相比具有提高的活性的PMA1；或f)将编码组成型活性PMA1或与相应野生型PMA1相比具有提高的活性的PMA1的pma1的一个或多个拷贝整合到所述微生物的基因组中，或所述修饰a)至f)的任何组合。

5.如权利要求4所述的微生物，其中pma1的所述内源性启动子被外源性启动子取代，所述外源性启动子以比所述内源性启动子高的水平诱导pma1的表达。

6.如权利要求5所述的微生物，其中所述外源性启动子对其中所述外源性启动子取代所述内源性启动子的微生物有特异性。

7.如权利要求4所述的微生物，其中对所述内源性pma1的修饰产生编码组成型活性PMA1的修饰的pma1，所述组成型活性PMA1是与相应野生型PMA1相比缺少来自C端的至少2至约30个氨基酸的PMA1。

8.如权利要求7所述的微生物，其中所述微生物是具有编码SEQ ID NO:1的PMA1的内源性pma1的酿酒酵母，其被基因修饰成产生编码截短的PMA1的修饰的pma1，所述截短的PMA1缺少来自SEQ ID NO:1的C端的至少2至约30个氨基酸。