[发明专利]腺相关病毒载体的生产方法

权利要求书

1.腺相关病毒(AAV)生产细胞，其包含编码以下的核酸序列：

AAV rep/cap基因；

辅助病毒基因；和

AAV载体颗粒的DNA基因组，

其中所述核酸序列全部一起整合于AAV生产细胞基因组内的单一基因座处。

2.权利要求1的AAV生产细胞，其中所述AAV核酸序列衍生自AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13或其组合。

3.权利要求2的AAV生产细胞，其中所述AAV核酸序列衍生自AAV2、AAV5和/或AAV9。

4.权利要求1至3中任一项的AAV生产细胞，其中所述辅助病毒基因衍生自腺病毒。

5.权利要求4的AAV生产细胞，其中所述辅助病毒基因包含衍生自腺病毒的E4、E2a和VA基因的全部或部分。

6.权利要求1至5中任一项的AAV生产细胞，其额外包含转录调控元件。

7.权利要求6的AAV生产细胞，其中所述转录调控元件是CMV启动子。

8.权利要求6或权利要求7的AAV生产细胞，其中所述转录调控元件额外包含至少一个Tet操纵子。

9.权利要求1至8中任一项的AAV生产细胞，其额外包含四环素抗性操纵子阻遏蛋白(TetR)。

10.权利要求1至9中任一项的AAV生产细胞，其额外包含绝缘子。

11.权利要求10的AAV生产细胞，其中在所述核酸序列各自之间存在绝缘子。

12.权利要求1至11中任一项的AAV生产细胞，其额外包含可选择标记。

13.权利要求12的AAV生产细胞，其中所述可选择标记是可扩增选择标记。

14.权利要求1至13中任一项的AAV生产细胞，其额外包含一种或多种转基因。

15.权利要求1至14中任一项的AAV生产细胞，其中所述AAV载体颗粒的DNA基因组包含在两个AAV ITR之间编码的一个或多个转基因。

16.权利要求1至15中任一项的AAV生产细胞，其中所述细胞是哺乳动物细胞。

17.权利要求1至16中任一项的AAV生产细胞，其中所述细胞进一步包含编码短发夹RNA(shRNA)的核酸序列和与编码所述shRNA的核酸序列可操作连接的诱导型启动子，所述shRNA靶向由AAV rep基因编码的AAV rep mRNA分子。

18.权利要求1至17中任一项的AAV生产细胞，其中所述细胞进一步包含编码以下的核酸序列：

腺病毒E1A基因；

靶向由所述腺病毒E1A基因编码的腺病毒E1A mRNA分子的shRNA；和

与编码靶向所述腺病毒E1A mRNA分子的shRNA的核酸序列可操作连接的诱导型启动子。

19.权利要求1至18中任一项的AAV生产细胞，其中靶向AAV rep mRNA分子或E1A mRNA分子的shRNA的核酸序列经微-RNA适应，用于通过RNA聚合酶II转录。

20.权利要求17至19中任一项的AAV生产细胞，其中所述诱导型启动子是Tet-响应性启动子，任选地，其中所述Tet-响应性启动子是Ptet-T6启动子。