[发明专利]用于减少有需要的受试者中NKCC1表达的载体和药物组合物，以及相关的治疗处理方法

说明书

本发明涉及基于使用人工microRNA(amiR)减少NKCC1表达的RNA干扰(RNAi)策略。特别地，本发明涉及通过使用人突触蛋白启动子驱动转基因表达来实现针对NKCC1的特异性amiR的神经元特异性表达的载体。

技术领域

本发明涉及减少有需要的受试者中NKCC1表达的载体、药物组合物和方法。

背景技术

由SLC12A2(NKCC1)编码的Na+、K+、2Cl-协同转运蛋白(NKCC)属于阳离子氯化物协同转运蛋白(CCCs)的亚家族，其提供钠、钾和氯化物跨质膜的电中性转运。几项证据表明，NKCC1通过调节细胞内氯化物的浓度参与多种疾病的发病机制。例如，最近的研究表明，氯化物协同转运蛋白NKCC1在DS小鼠模型和唐氏综合症患者的脑中过表达(Deidda et al.,2015；WO2015091857A1)。唐氏综合症(DS)是儿童和成人智力障碍的最常见原因。唐氏综合症是一种遗传疾患，由全部或部分的人类21号染色体的第三条拷贝的存在引起，因此也被称为21三体综合症。唐氏综合症几乎都以认知障碍、记忆力减退和学习困难为特点。因此，用NKCC1抑制剂(也是利尿的FDA批准的药物)布美他尼(Bumetanide)进行药物治疗可在DS的Ts65Dn小鼠模型中恢复突触可塑性和认知障碍(Deidda et al.,2015；WO2015091857A1)。但是，一些数据表明需要使用布美他尼进行终生治疗，从而潜在地引起不期望的过度利尿(这会损害治疗依从性)以及许多电解质长期失衡的相关副作用。此外，布美他尼的全身性治疗也会在除大脑以外的其他器官中阻断NKCC1的活性，这可能会引起耳毒性(Ben-Ari et al.,2016)。因此，有必要克服基于NKCC1活性降低的DS疗法的这些限制。

发明内容

本发明涉及减少有需要的受试者中NKCC1表达的载体、药物组合物和方法。本发明的范围由所附权利要求书限定。

具体实施方式

发明人已经基于使用人工microRNA(amiR)减少NKCC1表达开发了RNA干扰(RNAi)策略。通过用针对hNKCC1的反义靶向序列替换天然存在的初级microRNA(pri-miRNA)支架(scaffold)(例如小鼠microRNA155；基因库登录号：NR_029565.1)的21-22个核苷酸的反义靶向序列(所谓的引导链)来构建人工microRNA。特别地，发明人已设计了一种系统，该系统通过使用人突触素启动子驱动转基因表达来实现针对NKCC1的特定amiR的神经元特异性表达。

因此，在第一方面，本发明涉及用于减少有需要的受试者中NKCC1表达的治疗方法的载体，该载体包含编码能够降低NKCC1表达的amiR的多核苷酸，其中amiR包含选自由SEQID NO：4、8、15、16、18、23、25、39、40、44、45、53、57、64、66、67、68、69、82和88组成的组的至少一个核酸序列。

本发明的第二方面涉及用于减少有需要的受试者中NKCC1表达的治疗方法的药物组合物，该组合物包含根据本发明的载体。

本发明的第三方面涉及减少有需要的受试者中NKCC1表达的方法，包括向该受试者递送治疗有效量的根据本发明的载体。

通过下面的详细描述，本发明的其他特征和优点将变得显而易见。

如本文所用，用于“Na-K-Cl协同转运蛋白”的NKCC表示有助于钠、钾和氯化物主动转运进出细胞的蛋白质。该膜转运蛋白有几种变体或同种型，特别是NKCC1和NKCC2。NKCC1由SLC12A2基因(基因ID 6558)编码，并广泛分布于整个身体，但也分布在大脑中，且尤其是在发育中的动物和人脑中。它起到增加神经元中细胞内氯化物的作用，并从而使GABA更具兴奋性。大量研究表明，阻断NKCC1减少了细胞内的氯化物，从而增强GABA的抑制作用。示例性的人核酸和氨基酸序列分别由NCBI参考序列NM_001046.2和NP_001037.1表示。