[发明专利]比率荧光成像方法

权利要求书

1.一种用于检测生物样本中的生物活性区域的方法，该方法包括：

a)使生物样本与所述生物活性的比率荧光指示剂接触；

b)在第一发射波长下捕获所述生物样本的第一荧光强度图像，并且在第二发射波长下捕获所述生物样本的第二荧光强度图像；

c)组合所述第一荧光强度图像和所述第二荧光强度图像以创建荧光比率图像；

d)使用图像分析算法处理所述荧光比率图像、第一荧光强度图像、第二荧光强度图像或其任意组合，以检测生物活性区域，其中所述图像分析算法：

i)使用荧光比率阈值来创建所述荧光比率图像的掩模图像，和/或使用第一荧光强度阈值来创建所述第一荧光强度图像的掩模图像，和/或使用第二荧光强度阈值来创建所述第二荧光强度图像的掩模图像，

ii)如果两个或更多个掩模图像已在步骤i)中创建，则对所述两个或更多个掩模图像执行“与”逻辑运算，并且

iii)提供所述生物样本对于所述生物活性呈阳性或阴性的分类，其中所述分类基于对步骤i)中使用的所述荧光比率图像、第一荧光强度图像和第二荧光强度图像中的一个或更多个内目标区域的检测，其中所述荧光比率图像、所述第一荧光强度图像和所述第二荧光强度图像中的一个或更多个分别展现出超过在步骤i)中用于创建所述荧光比率图像的掩模图像的所述荧光比率阈值的荧光比率值，超过在步骤i)中用于创建所述第一荧光强度图像的掩模图像的所述第一荧光强度阈值的第一荧光强度值，以及超过在步骤i)中用于创建所述第二荧光强度图像的掩模图像的所述第二荧光强度阈值的第二荧光强度值，以及

iv)任选地将分类结果存储在计算机存储器中。

2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括显示所述荧光比率图像、所述第一荧光强度图像、所述第二荧光强度图像或其任意组合内的所述目标区域。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述生物样本是细胞样品、离体组织样品或体内组织样品。

4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(b)至(d)以限定的时间间隔重复两次或更多次，以提供一系列第一荧光强度图像、第二荧光强度图像和荧光比率图像，以供监测生物活性随时间的变化。

5.根据权利要求1所述的方法，其中使用内窥镜捕获所述第一荧光强度图像和所述第二荧光强度图像，并且所述目标区域的显示用来引导所述内窥镜的定位。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述比率荧光指示剂是具有如下结构的SDM-25：

7.根据权利要求1所述的方法，其中在创建所述荧光比率图像之前，用图像曝光时间对所述第一和第二荧光强度图像进行归一化。

8.根据权利要求1所述的方法，其中目标区域内的平均荧光比率或平均荧光强度值提供了所述目标区域中的生物活性的定性或定量度量。