[发明专利]3-羟基丁酰基-CoA脱氢酶变体以及使用方法

权利要求书

1.一种分离的核酸分子，选自：

(a)编码参考多肽的第一变体的第一核酸分子，其中(i)所述参考多肽具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列，(ii)所述第一变体包含相对于SEQ ID NO:2的一个或更多个氨基酸取代，和(iii)所述一个或更多个氨基酸取代选自表1；

(b)编码参考多肽的第二变体的第二核酸分子，其中所述第二变体(i)包含选自表1的相应变体的一个或更多个氨基酸取代，和(ii)具有与所述相应变体至少50％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％的序列同一性；

(c)第三核酸分子，其在高度严格杂交条件下与所述第一或第二核酸分子杂交，并且包含编码所述一个或更多个氨基酸取代的核酸序列；和

(d)第四核酸分子，其与所述第一核酸分子、所述第二核酸分子或所述第三核酸分子互补；

其中所述第一变体、所述第二变体、所述第三变体和所述第四变体不是天然发生的。

2.权利要求1的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子编码变体3-羟基丁酰基-CoA脱氢酶，相对于由SEQ ID NO:2的氨基酸组成的参考3-羟基丁酰基-CoA脱氢酶，所述变体3-羟基丁酰基-CoA脱氢酶在将乙酰乙酰基-CoA转化成3-羟基丁酰基-CoA的反应中具有提高的利用NADH作为辅助因子的能力。

3.权利要求2的分离的核酸分子，其中与所述参考3-羟基丁酰基-CoA脱氢酶相比，所述变体3-羟基丁酰基-CoA脱氢酶利用NADH作为辅助因子的能力高至少1.2倍。

4.权利要求2的分离的核酸分子，其中与所述参考3-羟基丁酰基-CoA脱氢酶相比，所述变体3-羟基丁酰基-CoA脱氢酶利用NADH作为辅助因子的能力高至少3倍。

5.权利要求2的分离的核酸分子，其中与所述参考3-羟基丁酰基-CoA脱氢酶相比，所述变体3-羟基丁酰基-CoA脱氢酶利用NADH作为辅助因子的能力高至少5倍。

6.权利要求2的分离的核酸分子，其中与所述参考3-羟基丁酰基-CoA脱氢酶相比，所述变体3-羟基丁酰基-CoA脱氢酶利用NADH作为辅助因子的能力高1.2倍到10倍之间。

7.权利要求1的分离的核酸分子，其中(a)所述分离的核酸分子是所述第二核酸分子，和(b)所述第二变体具有与选自表1的所述相应的变体至少80％、90％或95％的序列同一性。

8.一种参考多肽的分离的多肽变体，其中(a)所述参考多肽具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列，和(b)所述多肽变体选自表1并具有相对于SEQ ID NO:2的一个或更多个氨基酸取代。

9.一种分离的多肽变体，其中(a)所述多肽变体包含与SEQ ID NO:2或与选自表1的变体具有至少50％的同一性的序列；和(b)所述多肽变体包含相应于SEQ ID NO:2的选自C34、G35、P36、N37、S38和R40的一个或更多个位置的氨基酸取代。

10.权利要求9的分离的多肽变体，其中(i)所述相应于C34的氨基酸被替换为A、D、E、H、I、L、M、S、T、V或Y；(ii)所述相应于G35的氨基酸被替换为C、D、E、F、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V或Y；(iii)所述相应于P36的氨基酸被替换为S；(iv)所述相应于N37的氨基酸被替换为K；(v)所述相应于S38的氨基酸被替换为A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、Q、T、V、W或Y；(vi)所述相应于R40的氨基酸被替换为A、D、E、F、G、H、I、K、L、M N、P、Q、S、T、V或Y；或(vii)任意组合的(i)-(vi)的两个或更多个。