[发明专利]荧光化合物及应用该化合物的自噬检测试剂

说明书

提供由下述通式(I)或(II)表示的荧光化合物。其中，在上述通式(I)、(II)中，R¹、R¹¹表示烷基或ω‑氨基烷基；R²、R¹²表示氢原子或烷基；R³、R¹³表示由式‑(CH₂)_m‑表示的原子团，其中，m是10以下的自然数；R⁴、R¹⁴表示由式‑CH₂‑或‑NR⁶‑(‑NR¹⁶‑)表示的原子团，其中，R⁶、R¹⁶表示烷基；R⁵、R¹⁵表示由式‑(CH₂)_n‑表示的原子团，其中，n是10以下的自然数；R^N是由式‑NH₂、‑NHR⁷、‑NR⁷R⁸及‑N⁺R⁷R⁸R⁹(‑NHR¹⁷，‑NR¹⁷R¹⁸及‑N⁺R¹⁷R¹⁸R¹⁹)中的任一个表示的原子团，其中，R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹分别独立地表示烷基；当R²、R¹²为烷基且R⁴(R¹⁴)为由式‑NR⁶‑(‑NR¹⁶‑)表示的原子团时，R²和R⁶、R¹²和R¹⁶可相互结合形成环。

技术领域

本发明涉及新的荧光化合物及应用该化合物的自噬检测试剂。

背景技术

从酵母到人类的真核生物，普遍存在对于细胞内废弃的蛋白质、细胞器(organelle)等的细胞内成分进行再利用或代谢的降解过程，该过程被称为自噬(autophagy)。自噬被认为是在营养饥饿状态时非选择性地降解自身，以确保营养成分，用于在饥饿状态生存的生存机制，不过，根据之后的研究，阐明自噬通过去除变性蛋白质、防止在细胞内过量产生的蛋白质的积累、排除恶化的细胞器和病原性微生物等，还参与恒常性的维持、个体发育过程中的细胞程序性死亡、亨廷顿病(Huntington’s disease,HD)等疾病的抑制、细胞癌变的抑制等。

已知自噬具有多种具有不同机制的过程，例如，大自噬(macroautophagy)、小自噬(microautophagy)、分子伴侣介导的自噬(chaperone-mediated autophagy,CMA)等。根据初期的电子显微镜的研究，在大自噬中，由双层膜构成的隔离膜逐渐扩展，覆盖废弃物等的降解基质，形成自噬体(autophagosome)，然后，已确认自噬体的内容物在自噬体和溶酶体(lysosome)融合的自噬溶酶体(autolysosome)阶段被消化酶降解。无论是哪种过程，共通点是降解基质最终移到溶酶体，并在那里进行降解。

近年来，关于自噬的分子机构的阐明也在不断推进，与自噬相关的基因等也被确认。作为自噬的检测方法，虽然存在一种溶解细胞并通过蛋白质免疫印迹法(westernblot)和免疫染色法从获得的mRNA确认自噬相关因子的表达量的方法(例如，参照专利文献1)，不过由于这个方法会破碎细胞，不能适用于活细胞成像(live cell imaging)。