[发明专利]从头合成的组合核酸文库

权利要求书

1.一种合成变异核酸文库的方法，其包括：

a.提供编码至少500个多核苷酸序列的预定序列，其中所述至少500个多核苷酸序列具有预选的密码子分布；

b.合成编码所述至少500个多核苷酸序列的多个多核苷酸；

c.测定由所述多个多核苷酸编码的核酸或基于所述多个多核苷酸翻译的蛋白质的活性；以及

d.从步骤(c)的测定中收集结果，其中所述收集包括收集与阴性或无效结果相关的预定序列的结果。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(d)包括收集至少80％的所述预定序列的结果。

3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(d)包括收集至少90％的所述预定序列的结果。

4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(d)包括收集至少100％的所述预定序列的结果。

5.根据权利要求1所述的方法，其中呈现出预测多样性的至少约70％。

6.根据权利要求1所述的方法，其中呈现出预测多样性的至少约90％。

7.根据权利要求1所述的方法，其中呈现出预测多样性的至少约95％。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少500个多核苷酸序列中的至少80％具有正确的大小。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少500个多核苷酸序列中的至少约80％各自以所述文库中每个所述多核苷酸序列的平均频率的2倍以内的量存在于所述变异核酸文库中。

10.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括从步骤(c)的测定中收集与增强或降低的活性相关的预定序列的结果。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述活性是细胞活性。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述细胞活性包括增殖、生长、粘附、死亡、迁移、能量产生、氧利用、代谢活性、细胞信号传导、对自由基损伤的响应或其任意组合。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述变异核酸文库编码变异基因或其片段的序列。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述变异核酸文库编码抗体、酶或肽的至少一部分。

15.一种生成核酸组合文库的方法，该方法包括：

a.设计预定的序列，其编码：

(i)第一多个多核苷酸，其中所述第一多个多核苷酸中的每个多核苷酸编码与单个参考序列相比的变异序列，和

(ii)第二多个多核苷酸，其中所述第二多个多核苷酸中的每个多核苷酸编码与单个参考序列相比的变异序列；

b.合成所述第一多个多核苷酸和所述第二多个多核苷酸；以及

c.混合所述第一多个多核苷酸和所述第二多个多核苷酸以形成核酸的组合文库，其中呈现出预测多样性的至少约70％。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述组合文库是非饱和组合文库。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述组合文库是饱和组合文库。

18.根据权利要求15所述的方法，其中合成了至少10,000个多核苷酸。

19.根据权利要求16所述的方法，其中用于生成所述非饱和组合文库的多核苷酸的总数比用于生成饱和组合文库的多核苷酸的总数少至少25％。