[发明专利]用于检测分析物的方法

说明书

本公开提供用于使用单一固相检测多种分析物的方法。本公开还涉及固相的制备，所述固相包含容器，所述容器具有其上附着的针对至少两种不同分析物的抗体。本公开的方法可用于例如样品中分析物的定量检测及其测量。

相关申请的交叉参考

本申请要求2017年3月7日提交的美国临时申请第62/468114号的优先权的益处，其全部内容通过参考结合至本文中。

公开领域

本公开涉及用于检测和测量样品中的分析物的方法。本公开还涉及固相的制备，固相包含具有其上固定的抗体的容器，抗体针对至少两种不同的分析物。例如，本公开的方法可用于检测样品中的分析物及其测量。

背景

用于确定样品中特定分析物的存在和量的目前定量方法和测定(比如免疫测定)限于每个固相单一抗原(分析物)的识别。通常，这种定量方法限于使用固相，比如含有微孔的板或其上仅固定一种特定抗体的膜。参见US 2016/0289308、US 2016/0297893。一般地，在这种测定中使用的抗体以使其一旦结合样品中的抗原即可检测(或不可检测)的方式标记(例如荧光、放射性、发光、二抗)。因此，为了定量检测样品中的一种以上分析物，目前的测定采用单独的固相组分，每种固相组分具有对其上固定的一种特定分析物特异性的单一抗体。

先前利用单一固相检测多种分析物的尝试已涉及使用侧流测定(参见例如US2016/0289308、US 2016/0297893和US 2010/061377)。侧流测定需要测试样品沿着吸水或非吸水多孔固相(比如膜)以色谱方式流动。在典型的侧流测定中，将样品在第一位置(即应用区)应用于固相并穿过固相直至样品到达固相上的第二离散位置(第一测试区)，其包含对第一分析物特异性的第一抗体。然后分析第一测试区以确定样品中第一分析物的存在或量。然后样品必须流动直至其到达固相上的第三离散位置(第二测试区)，其包含对另一种分析物特异性的另一抗体。在侧流测定中，然后分析第二测试区以确定样品中分析物的存在或量。在侧流测定中确定分析物的存在需要在固相上的每个离散位置(测试区)处的可检测信号，其然后通过仪器比如荧光计读取。然而，为了辨别在每个区中检测到的每种分析物的量，一般地使用不同标记，比如不同波长的光、不同的荧光染料标记或不同的标记二抗。因此，侧流检测测定昂贵，技术复杂并且容易出现基于操作者的错误。

固相分析物免疫测定通常能够“检测”样品中多种分析物的存在，但仅能以定性方式。在一些情况下，包括其上固定多种分析物的固相的固相分析物免疫测定可为定量的，但这些限于竞争性测定。例如，在固相分析物免疫测定中，非抗体的分析物与固相结合。结合的分析物与样品中存在的分析物竞争结合对目标分析物特异性的标记抗体。在这些测定中，与含有全部与可检测抗体结合的所固定分析物的固相(即对照)相比较，在洗涤步骤中去除样品(和与其结合的抗体)，导致信号丧失。因此，当与对照相比较时，从减少信号推导出样品中分析物的存在。如上所述，使用单一固相检测多种分析物需要差异标记的抗体，并且需要将样品和特异性抗体应用和重新应用于固相。这种应用所需的多种标记抗体的应用和随后的洗涤步骤使得竞争性固相测定效率低，劳动强度大且成本高。另外，竞争性测定对非复合的标记抗体敏感，所述非复合的标记抗体与样品中存在的“免疫反应性”多肽种类而不是目标分析物结合，并因此易于产生假阳性。

通过使用其上连接多种抗体的固相来检测多种分析物的固相免疫测定通常为定性的。例如，当将样品提供给结合多种抗体的固相时，其每种对不同目标抗原特异性的抗体与样品接触；如果样品含有任何目标抗原则会产生信号。然而，该测定在没有不同的不同标记和用于检测每种不同标记的方法的情况下不能在样品中存在的许多目标抗原之间进行辨别。进一步地，在这种测定中获得的信号为由所有不同的结合抗原产生的信号的复合信号。因此，目前的方法在没有使用针对每种目标分析物的单独固相的情况下不能定量确定样品中存在多少特定目标抗原。

鉴于上述情况，产生对测定的每种分析物特异性的单独固相组分的要求使得多分析物测定不精确、昂贵、技术复杂且耗时。因此，需要能够使用单一固相定量检测样品中的多种分析物的方法。

公开概述