[发明专利]抗体选择方法

说明书

本文中报道了一种用于选择在食蟹猴中具有小于8mL/kg/天的全身清除率的抗体的方法，所述方法包括步骤：采用阳性线性pH梯度进行FcRn亲和色谱和采用阳性线性电导率/盐梯度上进行肝素亲和色谱，测量抗体的保留时间，并且选择抗体，所述抗体具有比SEQ ID NO:03和04的氧化型抗Her3抗体制备物的峰2和峰3保留时间之间的保留时间差异的1.78倍小的FcRn亲和色谱柱上相对保留时间，和比SEQ ID NO:01和02的抗pTau抗体的保留时间的0.87倍小的肝素亲和色谱柱上相对保留时间。

本发明属于重组抗体技术领域。本文中报道了一种用于基于两种正交亲和柱上(即FcRn亲和色谱柱和肝素亲和色谱柱上)的保留时间选择抗体的方法。

发明背景

G类人免疫球蛋白(IgG)含有两个赋予靶抗原特异性的抗原结合(Fab)区和一个负责与Fc受体相互作用的恒定区(Fc区)(参见，例如Edelman,G.M.,Scand.J.Immunol.34(1991)1-22；Reff,M.E.和Heard,C.,Crit.Rev.Oncol.Hematol.40(2001)25-35)。人IgG亚类IgG1、IgG2和IgG4具有21天的平均血清半衰期，其长于任何其他已知血清蛋白的平均血清半衰期(参见，例如Waldmann,T.A.和Strober,W.,Prog.Allergy 13(1969)1-110)。这种长半衰期主要由Fc区和新生Fc受体(FcRn)之间的相互作用介导(参见，例如Ghetie,V.和Ward,E.S.,Annu.Rev.Immunol.18(2000)739-766；Chaudhury,C.等人,J.Exp.Med.197(2003)315-322.)。这是为何使用IgG或含有Fc的融合蛋白作为广泛治疗药的类别的原因之一。

新生Fc受体FcRn是涉及IgG和白蛋白稳态、母源IgG跨胎盘转运及抗原-IgG免疫复合物吞噬的膜结合受体(参见，例如Brambell,F.W.等人,Nature 203(1964)1352-1354；Ropeenian,D.C.等人,J.Immunol.170(2003)3528-3533)。人FcRn是由糖基化I类主要组织相容性复合体样蛋白(α-FcRn)和β₂微球蛋白(β₂m)亚基组成的异二聚体(参见，例如Kuo,T.T.等人,J.Clin.Immunol.30(2010)777-789)。FcRn与Fc区的C_H2-C_H3区内的位点结合(参见，例如Ropeenian,D.C.和Akilesh,S.,Nat.Rev.Immunol.7(2007)715-725；Martin,W.L.等人,Mol.Cell 7(2001)867-877；Goebl,N.A.等人,Mol.Biol.Cell 19(2008)5490-5505；Kim,J.K.等人,Eur.J.Immunol.24(1994)542-548.)并且两个FcRn分子可以与Fc区同时结合(参见，例如Sanchez,L.M.等人,Biochemistry 38(1999)9471-9476；Huber,A.H.等人,J.Mol.Biol.230(1993)1077-1083.)。FcRn和Fc区之间的亲和力是pH依赖的，在内体pH 5-6显示纳摩尔亲和力及在生理pH 7.4显示相当弱的结合作用(参见，例如Goebl,N.A.等人,Mol.Biol.Cell 19(2008)5490-5505；Ober,R.J.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(2004)11076-11081；Ober,R.J.等人,J.Immunol.172(2004)2021-2029)。赋予IgG长半衰期的基础机制可以由三个基本步骤解释。首先，IgG受到多种细胞类型的非特异性吞饮作用(参见，例如Akilesh,S.等人,J.Immunol.179(2007)4580-4588；Montoyo,H.P.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 106(2009)2788-2793.)。其次，IgG在酸性内体中在pH 5-6遇到并结合FcRn，因而保护IgG免遭溶酶体降解(参见，例如Ropeenian,D.C.和Akilesh,S.,Nat.Rev.Immunol.7(2007)715-725；Rodewald,R.,J.Cell Biol.71(1976)666-669)。最后，IgG在胞外清除率中在生理pH 7.4释放(参见，例如Ghetie,V.和Ward,E.S.,Annu.Rev.Immunol.18(2000)739-766)。这种严格的pH依赖性结合和释放机制对IgG再循环至关重要并且在不同pH值的结合特征的任何偏差可能强烈地影响IgG的循环半衰期(参见，例如Vaccaro,C.等人,Nat.Biotechnol.23(2005)1283-1288)。