[发明专利]成纤维细胞衍生的外泌体刺激血管生成

权利要求书

1.一种刺激个体中的血管生成的方法，包括以下步骤：向所述个体施用有效量的成纤维细胞来源的外泌体或其一种或多种生物活性级分。

2.根据权利要求1所述的方法，进一步包括以下步骤：a)获得一个或多个成纤维细胞；b)在允许将外泌体产生到培养基中的条件下在培养物中培养所述成纤维细胞；c)从所述培养基中提取外泌体；和d)将所述提取的外泌体或其一种或多种生物活性级分施用至需要血管生成的个体。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述成纤维细胞来源于活检。

4.根据权利要求1、2或3所述的方法，其中所述成纤维细胞来自所述个体。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述成纤维细胞不是来自所述个体。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述成纤维细胞在允许成纤维细胞增殖的培养基中培养。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述允许成纤维细胞增殖的培养基包含对成纤维细胞是促有丝分裂的一种或多种因子。

8.根据权利要求7所述的方法，其中对成纤维细胞是促有丝分裂的所述因子包括选自包含以下的组的一种或多种因子：a)FGF-1；和b)FGF-2；c)FGF-5；d)EGF；e)CNTF；f)KGF-1；g)PDGF；h)富含血小板的血浆；i)TGF-α；j)HGF-1；和(k)它们的组合。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述成纤维细胞在缺氧条件下培养。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中在所述成纤维细胞处于增殖状态时从成纤维细胞收集外泌体。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中在成纤维细胞在不包含增殖诱导因子的培养基中或在包含与标准水平相比降低水平的增殖诱导生长因子的培养基中培养时从所述成纤维细胞收集所述外泌体。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中从已经在2-8％的氧气中培养至少1天的所述成纤维细胞收集所述外泌体。

13.根据权利要求12所述的方法，其中将细胞培养1-15天。

14.根据权利要求12所述的方法，其中将细胞培养5-10天。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中将细胞传代至少1次传代。

16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述外泌体处于制剂中，所述制剂包含少于5％的聚乙二醇。

17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述外泌体使用聚乙二醇纯化。

18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述外泌体使用超滤纯化。

19.根据权利要求17所述的方法，其中在纯化后将聚乙二醇添加至外泌体。

20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述外泌体表达选自以下的标志物：(a)CD63；(b)CD9；(c)MHC I；(d)CD56；和(e)它们的组合。