[发明专利]用于在酵母中生产聚酮化合物的方法和细胞系

权利要求书

1.一种生产聚酮化合物的方法，所述方法包括：

提供酵母细胞，所述酵母细胞包括编码聚酮化合物合成酶的第一多核苷酸，其中：

所述聚酮化合物合成酶用于由丙二酰基辅酶A生产至少一个种类的聚酮化合物，所述聚酮化合物具有结构I：

其中，在结构I上，R1是戊基，R2是H、羧基或甲基，并且R3是H、羧基或甲基；和

使所述酵母细胞繁殖，用于提供酵母细胞培养物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述聚酮化合物合成酶包括来自盘基网柄菌的DiPKS聚酮化合物合成酶。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述第一多核苷酸包括用于DiPKS聚酮化合物合成酶的编码序列，所述DiPKS聚酮化合物合成酶的一级结构与由SEQ ID NO:13的碱基535至9978限定的阅读框编码的蛋白质具有80％和100％之间的氨基酸残基序列同源性。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述第一多核苷酸与SEQ ID NO:13的碱基535至9978具有80％和100％之间的碱基序列同源性。

5.根据权利要求2至4中任一项所述的方法，其中所述至少一个种类的聚酮化合物包括在R2处具有甲基的聚酮化合物。

6.根据权利要求2所述的方法，其中：

所述DiPKS聚酮化合物合成酶包括影响C-Met结构域的活性位点的突变，用于减轻所述至少一个种类的聚酮化合物的甲基化，使得所述至少一个种类的聚酮化合物包括其中R2是甲基并且R3是H的第一聚酮化合物，和其中R2是H并且R3是H的第二聚酮化合物。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述DiPKS聚酮化合物合成酶包括DiPKS^{G1516D；G1518A}聚酮化合物合成酶。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述第一多核苷酸包括用于所述DiPKS^G1516D；^G1518A聚酮化合物合成酶的编码序列，所述DiPKS^{G1516D；G1518A}聚酮化合物合成酶的一级结构与由SEQ ID NO:9的碱基523至9966限定的阅读框编码的蛋白质具有80％和100％之间的氨基酸残基序列同源性。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述第一多核苷酸与SEQ ID NO:9的碱基523至9966具有80％和100％之间的碱基序列同源性。

10.根据权利要求6所述的方法，其中所述DiPKS聚酮化合物合成酶包括DiPKS^G1516R聚酮化合物合成酶。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述第一多核苷酸包括用于所述DiPKS^G1516R聚酮化合物合成酶的编码序列，所述DiPKS^G1516R聚酮化合物合成酶的一级结构与由SEQ ID NO:10的碱基523至9966限定的阅读框编码的蛋白质具有80％和100％之间的氨基酸残基序列同源性。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述第一多核苷酸与SEQ ID NO:10的碱基523至9966具有80％和100％之间的碱基序列同源性。

13.根据权利要求2所述的方法，其中所述DiPKS聚酮化合物合成酶包括降低在所述DiPKS聚酮化合物合成酶的C-Met结构域的活性位点处的活性的突变，用于防止所述至少一个种类的聚酮化合物的甲基化，使得所述至少一个种类的聚酮化合物具有氢R2基团和氢R3基团。