[发明专利]亲水化着色纤维素微粒

说明书

本发明提供能够维持高的检测灵敏度、并且大幅减少假阳性的着色纤维素微粒、使用其的免疫层析诊断试剂盒。着色纤维素微粒、在该着色纤维素微粒的羧基上以共价键结合有配体的结构体、及包含该结构体的免疫层析诊断试剂盒，所述的着色纤维素微粒的特征在于，平均粒径为60～900nm，显色强度为1.0～10.0，在微粒表面具有亲水层、并且在微粒表面借助间隔基团导入有羧基。

技术领域

本发明涉及在微粒表面具有亲水层、并且借助间隔基团导入有羧基的着色纤维素微粒、以及使用其的诊断药试剂盒及体外诊断药。

背景技术

近年来，医疗领域、食品领域中期望能够简便并且迅速地判断疾病、病原菌等的有无的技术。为了应对这些需要，开发了各种各样的技术。目前，能够简便并且迅速地进行流感等病原体感染的有无、妊娠的有无、癌标记物、心肌标记物的有无、食品中的过敏物质、成为食物中毒原因的物质的有无等各种各样的检查。作为所述技术，开发了免疫层析测定法、荧光免疫层析测定法、酶免疫测定法、胶乳凝集测定法、化学发光测定法等许多测定方法。其中，能够通过目视进行判断的免疫层析测定法具有下述特征：不需要特别的装置、专业的知识，任何人都能简便地迅速诊断，因此被广泛使用。例如，作为免疫层析测定法的一种的妊娠检查药等在一般药房中就能获得，对于消费者而言通用性高。

免疫层析测定法(以下，称为“免疫层析”)利用抗原抗体反应，有夹心法、竞争法等方法。测定方法大致分为使检测物相对于膜在水平方向展开的侧流(Lateral Flow)式、在垂直方向展开的流通(Flow Through)式。从简便性的观点出发，大多采用以侧流式使用夹心法来用抗体捕捉抗原的方法。测定步骤如下：

(i)在硝基纤维素等的膜上，将与作为检测对象的抗原等反应的抗体固定于特定部位(测试线)；

(ii)制作被称为显色颗粒的标记物质上负载有与检测对象反应的抗体的检测试剂，涂布于结合垫上后使其干燥，将前述膜、样品垫、吸收垫组合而制作免疫层析试剂盒；

(iii)将混合有想要检查抗原有无的待检体的显影液滴加到样品垫上，通过目视(或简易的免疫层析读取仪)观察测试线(TL)的显色的有无，判断抗原的有无。待检体中有抗原的情况下，在测试线上线显色。

通常，通过目视判定的情况大多作为仅判断有无作为检测对象的抗原的定性分析而使用。

作为免疫层析中使用的显色颗粒，例如，以下的专利文献1中公开了金胶体，而且以下的专利文献2中公开了着色胶乳。这些显色颗粒的问题在于，由于微粒表面是疏水性的，因此会引起蛋白质等生物分子吸附的非特异性吸附这样的现象。若引起非特异性吸附，则有作为免疫层析中最大问题之一的假阳性产生的担心。假阳性是指，尽管在待检体中不存在检测对象，但在测试线上线显色。若产生假阳性，则会导致误诊，因此市售免疫层析试剂盒的情况下，不使其产生假阳性是必不可少的。作为假阳性的产生机制之一，可以认为是，借助非特异性吸附于显色颗粒的物质，显色颗粒吸附于涂布于测试线的抗体。因此，以下的专利文献3中公开了通过使亲水性的聚乙二醇 (PEG)结合于疏水性的金胶体表面的方法来抑制非特异性吸附、减少假阳性。但是，该方法中有抗体抗原反应被微粒表面的PEG链的立体结构所阻碍、检测灵敏度降低的担心。像这样，通常在进行假阳性减少对策时检测灵敏度会降低的情况是常见的。

该状况下，以下的专利文献4中公开了通过使着色纤维素微粒与抗体化学结合来达成非常高的检测灵敏度。由于该微粒源自纤维素，因此与金胶体等相比，虽然表面有呈若干亲水性，但还是疏水性，有引起非特异性吸附的可能性，与目前为止的显色颗粒同样地尚有产生假阳性的风险。

如上所述，尚需要提供维持高的检测灵敏度、并且减少假阳性的技术，作为其中之一，强烈期望开发能够在不阻碍抗体抗原反应的情况下大幅抑制非特异性吸附的显色颗粒。

现有文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2015/163384A1号