[发明专利]B细胞群的制备方法、以及使用了其的单克隆抗体的制备方法

说明书

本发明的课题在于提供一种效率良好地制备包含识别特定抗原的B细胞的B细胞群的方法。根据本发明，可以提供一种B细胞群的制备方法，该方法包括：工序c，一边施加CD40及BAFF受体介导的刺激，一边在IL‑21不存在下、IL‑4不存在下、且在除了IL‑21和IL‑4以外的细胞因子的存在下与特定抗原一起培养包含B细胞的细胞群；以及，工序d，一边施加Fas介导的刺激，一边培养所述包含B细胞的细胞群，得到包含识别所述特定抗原的B细胞的B细胞群。

技术领域

本发明涉及B细胞群的制备方法、以及使用了其的单克隆抗体的制备方法。

背景技术

对特定的抗原显示出高选择性的单克隆抗体可以期待开发成抗体药物，特别是正在进行以癌细胞为靶标的抗体药物的开发。为了将以单克隆抗体作为有效成分的药物应用于人的治疗，从避免排斥反应的观点出发，最理想的是给药异种抗原量少的人的抗体。因此开发出了多种嵌合抗体、人源化抗体。

在使小鼠等多次免疫抗原后，将脾脏、淋巴结的细胞与骨髓瘤细胞融合而形成杂交瘤，以杂交瘤所产生的小鼠IgG抗体为基础，使用重组技术制作了通常人治疗用的嵌合抗体、人源化抗体。然而，使用小鼠等动物个体方面、对产生显示出高亲和性的抗体的杂交瘤进行选择方面花费时间，需要确认通过重组技术得到的抗体的活性。因此，在上述的方法中，不仅制造目标抗体花费时间，而且直至对人给药为止，无法确定其效果。另外，在免疫抗原显示出个体毒性时难以对个体进行免疫。此外，在以动物物种间保守性高的蛋白抗质抗原作为抗原时，由于免疫耐受而难以产生抗体。

B细胞是来自骨髓的细胞、且是在表面具有B细胞受体(BCR)的免疫细胞，是产生抗体的细胞。B细胞由造血干细胞生成，经过祖B细胞和前B细胞而分化为B细胞。已知在生发中心选择产生对抗原显示出高亲和性的抗体的B细胞，但该选择的机制尚未得到充分阐明。如果能使产生对特定抗原显示出高亲和性的抗体的B细胞进行人工增殖并浓缩，就能够以更短的时间制备对特定抗原显示出高亲和性的单克隆抗体。

专利文献1中记载了一种包含特定抗原特异性的IgG阳性B细胞的抗原特异性B细胞群的制备方法，该方法包括：在IL-21的存在下对IgG阳性B细胞施加CD40、BAFF受体、Fas介导的刺激，并且与上述特定抗原一起进行培养，筛选对上述特定抗原有特异性的抗原特异性B细胞，得到包含对上述特定抗原有特异性的IgG阳性B细胞的抗原特异性B细胞群。

专利文献2中记载了一种B细胞群的制备方法，该方法包括如下工序：在作用于CD40和/或BAFF受体的手段的存在下，对提高了Bach2基因的表达的B细胞进行培养。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利第5550132号

专利文献2：国际公开WO2016/002760号公报

发明内容

发明所要解决的课题

本发明要解决的课题在于提供效率良好地制备包含识别特定抗原的B细胞的B细胞群的方法。

用于解决课题的方法

本发明人等为了解决上述课题而进行了深入研究，结果发现，一边施加CD40及BAFF受体介导的刺激，一边在IL-21不存在下、IL-4不存在下、且在除了IL-21和IL-4以外的细胞因子的存在下与特定抗原一起培养包含B细胞的细胞群，接着，一边施加Fas介导的刺激，一边培养上述包含B细胞的细胞群，由此，能够效率良好地制备包含识别特定抗原的B细胞的B细胞群，从而完成了本发明。

即，根据本发明可提供以下的发明。

[1]一种B细胞群的制备方法，该方法包括：