[发明专利]用天然或半合成交联剂交联的透明质酸

说明书

本发明涉及用以下所有三种天然或半合成交联剂交联的透明质酸：琼脂糖、羟丙基甲基纤维素和泛醇，其作为药物或在美容医学中的用途，以及其制备方法。

技术领域

以下发明涉及用天然和半合成交联剂交联的透明质酸、其制备方法、以及其作为药物和在美容医学中的用途。

背景技术

透明质酸是由β-D-葡萄糖醛酸和β-D-N-乙酰氨基葡萄糖的交替重复单元组成的多糖型的线性聚合物，并且其是存在于许多动物组织中的组分。例如，其包含在哺乳动物的结缔组织、在湿疣、在链球菌属(Streptococcus)包膜中。

透明质酸，作为动物组织的组分之一，因此是致敏作用小的、最安全、最无害的物质之一。

目前有两种不同的工业制备透明质酸的途径，第一种本质上是从例如湿疣、牛眼球等动物组织中提取的方法，而第二种提供了细菌发酵方法。然而，用这些方法得到的透明质酸含有大量的杂质如蛋白质，特别是内毒素性质的那些。这样的问题例如在皮内填充物组合物即所谓的填充物的情况中极为重要，这是由于成品注射产品中细菌内毒素浓度越低，接受者皮肤组织中的刺激-免疫反应的发生风险越低。这类反应可引起相当严重的肉芽瘤型的炎症反应，以至于欧洲共同体必须在技术法规中对这类产品设定小于0.5EU/ml的内毒素阈值(指令2007/47/EC 93/42和93/42/EEC医疗器械III级)

本领域已知许多以减少蛋白质为主要目的的方法，然而其达到的纯度限度远低于上述欧洲标准。

例如，在US 3,396,081中，描述了一种用于从蛋白质、抗原和致热原中纯化透明质酸的方法，其包括从动物器官中获得含有透明质酸的粉末形式的原料，下一步提供了这类粉末在碱性水溶液中的悬浮液的形成并且涉及加热以获得蛋白质的变性。最终，通过蛋白水解酶将如此变性的蛋白质分解为相应的氨基酸，将其通过离子交换树脂除去。

US4141973提供了用氯仿处理的透明质酸的脱蛋白步骤。通过该方法，得到了蛋白质残留量等于0.5％的透明质酸。

在WO86/06728中，描述了一种用于透明质酸脱蛋白的方法，其包括从蛋白质水溶液中沉淀透明质酸和蛋白质，其后用醇变性，在溶剂中溶解透明质酸和蛋白质，其中透明质酸为可溶性的且蛋白质被消化。用该方法还得到具有0.5％蛋白质残留量的透明质酸。

通过EP239995中所描述的方法得到从透明质酸中消除蛋白质的略微改进，其提供了以下步骤：通过沉淀法从原料中分离透明质酸，然后通过添加DNase和RNase来进行核苷酸的分解，保持培养直至完全消化核苷酸，然后用1％蛋白酶脱蛋白并且保持培养直至完全消化蛋白质。

在进行核苷酸分解和脱蛋白后，然后通过相关复合物的形成用烷基或芳基型的季铵盐清洗透明质酸，通过添加过量的十二烷基硫酸钠来解络透明质酸并且使透明质酸沉淀。

由此得到的透明质酸具有0.2-0.3％范围内的蛋白质残留量。

基于透明质酸得到的可吸收移植体中的另一个普遍存在的问题是其吸水能力，其为尤其是在所谓填充物或可最小化皱纹的皮内制剂的领域中的一个非常重要的性质。

实际上，吸水能力越大，其与体液接触时增加自身体积的能力越大，并且填充由皱纹或其他皮肤瑕疵导致的皮沟(skin groove)的能力越大。

另一方面，公知可例如通过透明质酸的交联来化学转化透明质酸使得其更易吸水来增加吸水能力。该反应允许得到更具粘弹性并且不易被巨噬细胞攻击的交联的透明质酸。

WO 86/00079、US 5,827937和WO02/06350描述了在40-50℃下在酸性和/或碱性溶液中用例如丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)等交联剂进行的透明质酸的交联方法，其后中和反应混合物。

这些交联方法具有一些缺点，主要是由以下的事实引起的：相当高的交联温度可导致透明质酸的破坏和降解，从而损害终产物的性能。